细胞划痕实验原理及步骤

2018.11.12 17:51
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一、细胞划痕实验原理

  细胞划痕实验(Wound Healing)是一种操作简单,经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是,当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”,划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合,在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程,是研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。

细胞划痕实验.png

  二、细胞划痕实验步骤

  1、细胞划痕实验所需材料:

  6孔板

  marker笔

  直尺

  20微升枪头(灭菌)

  无血清培养基

  PBS

  2、细胞划痕实验具体步骤如下:

  (1)准备工作:所有能灭菌的器械都要灭菌,直尺和marker笔在操作前紫外照射30min(超净台内)

  (2)先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀地划横线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。

  (3)在空中加入约5X105个细胞,具体数量因细胞不同而不同,掌握为过夜能铺满。

  (4)第二天用枪头比着直尺,尽量垂直于背后的横线划痕,枪头要垂直,不要倾斜。

  (5)用PBS洗细胞3次,去除划下的细胞,加入无血清培养基。

  (6)放入37℃5%CO2培养箱培养。按0、6、12、24小时取样,拍照。

  三、细胞划痕实验注意事项

  1.划痕法测量适用的细胞范围较小,一般只适用于上皮细胞,纤维样细胞。

  2.虽然无血清培养可以忽略细胞增殖的影响,但是由于细胞内信号传导系统整体性的下调节,细胞迁移的速度也会慢很多。


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