亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与老年高血压伴高同型半胱氨酸血症及颈动脉硬化的相关性研究

　　亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与老年高血压伴高同型半胱氨酸血症及颈动脉硬化的相关性研究

　　安芳，赵季红，王静，丛洪良

　　摘要：目的 探讨5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase.MTHFR)基因多态性与血浆同型半胱氨酸( homocysteine，Hcy)水平的关系及对老年H型高血压患者颈动脉内膜中层厚度(intima-media thick-ness，IMT)的影响。方法 选择2016年1月～2017年6月在武警后勤学院附属医院心内科住院的老年高血压患者260例，根据血浆Hcy水平将患者分为H型高血压组117例(Hcy≥15 timol/L)，普通高血压组143例(Hcy<15t_Lmol/L)，同期选取我院体检的老年正常血压对照组99例(Hcy<15llmol/L)，进行血浆Hcy及MTHFR基因C677T多态性检测，并采用超声检查测量颈动脉IMT。结果 H型高血压组和普通高血压组收缩压、舒张压水平明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。H型高血压组Hcy、颈动脉IMT明显高于普通高血压组和对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。3组CC、CT、TT基因型及C、T等位基因频率比较，差异有统计学意义(P<0. 05)。H型高血压组TT基因型及T等位基因频率明显高于普通高血压组及对照组(29. 1% vs 18.2%，16.2%;49. 1% vs 36. 4%，32. 3%，P45. 5%，51.5%;50.90/ vs 63.6%，67. 7%，P<0.05)H型高血压组和普通高血压组不同基因型血浆Hcy水平比较，差异有统计学意义(P<0.05)。多因素逐步回归分析显示，年龄、收缩压、空腹血糖、Hcy、LDL-C是颈动脉IMT增厚的独立危险因素(P<0.05，P<0.01)结论 MTHFR基因C677T多态性与血浆Hcy水平相关，可能通过升高血浆Hcy水平，间接参与颈动脉粥样硬化的发生和发展。

　　关键词：亚甲基四氢叶酸还原酶(NADPH);高半胱氨酸;高血压;基因型;动脉粥样硬化

　　H型高血压即为伴有同型半胱氨酸( homocysteine，Hcy)水平升高的原发性高血压。由于测定方法和种族人群分布的不同，其正常值亦不同，一般在正常空腹情况下，Hcy为5～15 Umol/L。Hcy是动脉粥样硬化性血管疾病的独立危险因素，并与动脉粥样硬化病变呈明显的计量关系，其水平受体内5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶( methylenetetra-hydrofolate reductase，MTHFR)的影响‘1]。研究发现，MTHFR基因C677T突变可以通过抑制酶活性进而升高血浆Hcy水平‘2]。而颈动脉内膜中层厚度(intima-mediathickness，IMT)作为反映全身动脉粥样硬化的“窗口”，是预测心血管疾病风险的重要指标‘3]。目前，关于颈动脉IMT与MTHFR基因多态性的关系尚不明确，本研究即通过分析老年H型高血压患者MTHFR基因C677T多态性对血浆Hcy水平的影响，并进一步探讨两者与颈动脉IMT的关系，为H型高血压的个体化防治提供临床资料。

　　1 资料与方法

　　1.1研究对象选择2016年1月～2 017年6月在武警后勤学院附属医院心内科住院的老年高血压患者260例，其中男性142例，女性118例，年龄60～82(68. 87±9.21)岁。将患者根据血浆Hcy水平分为H型高血压组117例(Hcy≥DOI:10. 3969/j. issn. 1009-0126. 2018. 10. 02115 yLmol/L)，男性61例，女性56例，年龄60～82(69. 25±8.76)岁;普通高血压组143例(Hcy< 15 Umol/L)，男性81例，女性62例，年龄60～80(68. 32±8.58)岁。同期选取我院体检的老年正常血压对照组99例( Hcy<1511mol/L)，男性53例，女性46例，年龄60～80(66.13±8.87)岁。纳入标准：H型高血压组及普通高血压组符合中国高血压防治指南(2010修订版)高血压诊断标准。排除标准：继发性高血压、严重心功能不全、急性心肌梗死、糖尿病血管并发症、严重肝肾功能不全及恶性肿瘤以及近期服用过叶酸、维生素B12等影响Hcy水平药物的患者。入选者签署知情同意书，通过我院伦理委员会批准。

　　1.2方法 对所有研究对象进行详细病史询问及体格检查。清晨抽取空腹卧位静脉血5 ml，采用全自动生化仪测定空腹血糖、血脂等生化指标;采用西门子2400生化分析仪用酶循环法检测血浆Hcy水平，Hcy升高诊断标准为空腹Hcy≥15tlmol/L。

　　1.3检测颈动脉IMT采用西门子S2000彩色超声诊断仪，高频线阵探头，频率3～15 MHz，对颈动脉IMT及斑块进行测量。检查前嘱患者休息5～10 min，取平卧位，头偏向检查对侧，充分暴露颈部。选取颈动脉膨大下1 cm或以IMT厚处及近心1 cm、远心l cm 3点的厚度，左右两侧6点的均值作为IMT，并观察有无斑块形成。正常IMT<1.Omm，≥1.O mm表示IMT增厚，≥1.5 mm定义为斑块。

　　1.4 测定MTHFR基因C677T基因型 采用PCR-RFLP法对入选者血液样本进行基因型检测。使用EDTA管留取患者空腹静脉血5 ml，提取基因组DNA，使用PCR方法扩增目的基因片段。MTHFR基因C677T引物序列由上海生工生物医学有限公司( Sangon)合成。上游引物：5’一TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3’，下游引物：5’一AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3’。PCR反应条件：95℃预变性5 min，加入TaqDNA聚合酶0.4"l，95℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸60 s，35个循环;再72℃延伸7min。PCR产物在37℃下用Hinf I酶切后产生3种基因型：CC型、TT型、CT型。

　　1.5统计学方法 采用SPSS 15.O统计软件，计量资料以x土s表示，2组均数比较采用￡检验，多组间比较采用方差分析，计数资料以百分率表示，采用Z2检验，采用多元逐步回归分析，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2结 果

　　2.1 3组一般临床资料比较3组年龄、性别、体质量指数、吸烟、TC、TG、HDL-C、LDL-C、空腹血糖比较，差异无统计学意义(P>0.05)。3组收缩压、舒张压、Hcy、颈动脉IMT比较，差异有统计学意义(P<0.05)组和普通高血压组收缩压、舒张压水平明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。H型高血压组Hcy、颈动脉IMT明显高于普通高血压组和对照组，差异有统计学意义(P<0.05).

　　2.2 3组MTHFR基因C677T基因型和等位基因频率比较3组CC、CT、TT基因型频率及C、T等位基因频率比较，差异有统计学意义(P<0.05)。H型高血压组TT基因型及T等位基因频率明显高于普通高血压组及对照组，CC基因型及C等位基因频率明显低于普通高血压组及对照组(30.8%vs 45. 5%,51. 5%; 50. 9%u5 63.6%,67. 7% ,P通高血压组TT基因型及T等位基因频率与对照组比较，差异无统计学意义(P>O. 05，表2)。

　　2.3 3组不同基因型血浆Hcy水平比较H型高血压组和普通高血压组TT型血浆Hcy水平明显高于CT型及CC型(P<0.05)比较，差异无统计学意义(P>O. 05，表3)。

　　表2 3组MTHFR C677T基因型和等位基因频率比较

　　注：与对照组比较，a P

　　表3 3组不同基因型血浆Hcy水平比较(ymol/I。，x土s)

　　注：与CC型比较，aP

　　2.4颈动脉IMT增厚影响因素的多元逐步回归分析 以颈动脉IMT是否增厚为因变量，年龄、收缩压、舒张压、体质量指数、Hcy、血脂、空腹血糖及MTHFR基因C677T基因分型为自变量，进行多因素逐步回归分析显示，年龄、收缩压、空腹血糖、Hcy、LDI，-C是颈动脉IMT增厚的独立危险因素(P<0.05).

　　表4颈动脉IMT增厚影响因素的多元逐步回归分析

　　表1 3组一般临床资料比较

　　注：与对照组比较，aP

　　3讨论

　　Hcy是一种含巯基的氨基酸，是甲硫氨酸和半胱氨酸代谢过程中的中间产物。高Hcy血症是动脉粥样硬化及其血管并发症的独立危险因素。其致病机制主要有：通过产生超氧化物及过氧化物，损伤血管内皮细胞;抑制NO合成并促进其降解，使血管平滑肌收缩;促进动脉平滑肌细胞增殖;通过增加血小板黏附能力，促进血小板衍生因子生成，同时激活凝血因子，抑制血栓调节素表达及其活性，促进血栓形成等。而高血压与高Hcy血症对促进心脑血管疾病的发病具有协同作用，研究发现，伴有高Hcy血症的高血压患者发生心脑血管疾病风险较普通高血压患者明显升高，且病死率明显增加口]。有研究发现，与对照组比较，新诊断原发性高血压组血浆Hcy水平明显升高，且为颈动脉IMT增厚的独立危险因素。本研究中H型高血压组Hcy、颈动脉IMT明显高于普通高血压组和对照组，与上述研究相一致。提示我们H型高血压患者具有更高的颈动脉粥样硬化发病风险。Hcy水平主要受环境因素和遗传因素的双重影响。

　　Hcy代谢过程中酶功能障碍或维生素缺乏均可导致血浆Hcy升高。MTHFR是Hcy代谢过程中的一个关键酶。目前发现，MTHFR基因有30多种突变类型，其中常见的突变即为MTHFR基因C677T，导致不耐热MTHFR活性下降，引起血浆Hcy水平升高。其基因型分为CC、CT、TT 3种类型，发生TT型突变时酶活性会下降60%，CT杂合子突变酶活性介于TT型与CC型酶活性之间。目前已有关于MTHFR基因C677T多态性与血浆Hcy水平及高血压相关性的研究。如Ni等‘胡对中国云南地区330例健康志愿者MTHFR基因C677T多态性与血浆Hcy水平进行研究发现，与携带CT和CC基因型人群比较，TT基因型人群发生高Hcy概率明显增高。国内有研究发现，天津地区人群MTHFR基因C677T多态性及血浆Hcy水平是老年单纯收缩期高血压发病的独立危险因素。本研究发现，H型高血压组TT基因型及T等位基因频率明显高于普通高廊压组及对照组，且H型高血压组及普通高血压组TT型血浆Hcy水平明显高于CT型及CC型，提示MTHFR基因C677T多态性与血浆Hcy水平及H型高血压相关联。

　　国内Sun等‘71对北京房山地区人群研究发现，MTHFR基因C677T基因型与颈动脉IMT明显相关。但也有研究认为，MTHFR基因C677T突变虽然可以引起Hcy升高，但与颈动脉粥样硬化并无明显相关性‘8]。因此，对于MTHFR基因C677T多态性是颈动脉粥样硬化相对独立的危险因素抑或为通过升高Hcy水平间接促使动脉粥样硬化的发生成为近年来国内外研究的热点。本研究经多元逐步回归分析显示，在校正了传统危险因素后，年龄、收缩压、空腹血糖、Hcy、LDI。-C进入回归方程，是颈动脉IMT增厚的独立危险因素，但MTHFR基因C677T基因型未进入回归方程，提示高Hcy水平促进颈动脉粥样硬化的形成，MTHFR基因C677T纯合突变可能通过引起Hcy水平升高，间接参与动脉粥样硬化的发生、发展。其原因可能与Hcy升高不仅同MTHFR基因C677T突变有关，还与血清叶酸水平及其他代谢酶基因多态性等遗传因素相关。

　　总之，本研究表明，血浆Hcy水平升高是颈动脉IMT增厚的独立危险因素，在颈动脉粥样硬化形成中具有一定的作用，特别是对老年高血压患者，高Hcy与高血压协同作用，更易发生动脉粥样硬化性改变，进而增加心脑血管疾病发生风险。而遗传因素特别是MTHFR基因C677T多态性对血浆Hcy水平又发挥了重要影响。因此，提示我们常规测定血浆Hcy，进行MTHFR基因多态性筛选，并对TT型老年高血压人群有针对性的进行早期的维生素B12、叶酸等干预，可以降低血浆Hcy水平，对动脉粥样硬化进行早期预防，从而为老年H型高血压的防治提供新的方向。

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