侵袭性骨肿瘤组织中P53、P21、Bcl-2的表达

　　侵袭性骨肿瘤组织中P53、P21、Bcl-2的表达

　　董孝龙

　　【摘要】目的探讨侵袭性骨肿瘤组织中P53、P21、B细胞淋巴瘤/白血病一2(Bcl-2)的表达及其意义。方法应用免疫组化和凋亡试剂盒检测62例侵袭性骨肿瘤组织中P53、P21、Bcl-2的表达和细胞凋亡情况。结果良性骨肿瘤细胞凋亡率为76. 31010，高于恶性骨肿瘤的53.28% (P <0.05)。良性骨肿瘤组织中P53、P21、Bcl-2阳性表达表达率分别为66. 51%、45.58%、0.00%，低于恶性骨肿瘤的79. 540/0、72. 89%、22. 56u/。(P均<0. 05)。COX比例风险模型分析显示恶性骨肿瘤组织中P53、P21和Bcl-2蛋白表达与年龄、类型、病程、侵袭程度有关(P均<0. 05)。结论P53、P21、Bcl-2在侵袭性骨肿瘤组织中异常表达，并在骨肿瘤的发生、发展中可能起重要作用。

　　【关键词】侵袭性骨肿瘤;细胞凋亡;P53;P21;B细胞淋巴瘤/白血病一2

　　DOI:10. 3969/j. issn. 1673 -5412. 2018. 04. 004

　　[中图分类号]R738.1;R730.4 [文献标识码]A [文章编号]1673 -5412(2018)04 -0290 -03

　　Expressions of P53, P21 and B-cell Lymphoma/Leukemia-2 in the Invasive Bone Tumor DONG Xiaolong( Department of Orthopaedics, Shangqiu Fourth People's Hospital, Shangqiu 476005, China)[ Abstract] Objective To explore the expression and significance of P53 , P21 and B-cell lymphoma/leukemia-2 (Bcl-2) in the invasive bone tumor. Methods Immunohistochemistry and apoptosis assay were used to detect the expressions of P53 , P21 , Bcl-2 and the apoptosis in the bone tumor. Results The apoptosis rate ( 76. 31% ) of thebenign bone tumor was higher than that of the malignant bone tumor (53. 280/o , P < 0. 05) . The positive expression rates of P53, P21 and Bcl-2 0f the benign bone tumor (66. 51u/o , 45.58% and O.OOa/o ) were lower than those ofthe malignant bone tumor ( 79. 54% , 72. 89% and 22. 560/o ; P < 0. 05). COX proportional risk model analysis showed that the expressions of P53 , P21 and Bcl-2 protein in the malignant bone tumor were related to age, type,course and invasion degree ( P < 0. 05) . Conclusion The expressions of P53 , P21 and Bcl-2 are abnormal in theinvasive bone tumors, and may play an important role in the occurrence and development of bone tumors.

　　[Key words] invasive bone tumor; cell apoptosis; P53; P21; B-celllymphoma/leukemia-2

　　侵袭性骨肿瘤有骨巨细胞瘤、动脉瘤样骨囊肿、成软骨细胞及骨细胞瘤等。侵袭性骨肿瘤细胞凋亡及P53、P21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2，Bcl-2)的表达关系是目前基因研究的热点问题。本文选取我院2014年1月至2017年1月收治的侵袭性骨肿瘤患者62例，对其肿瘤组织凋亡情况及P53、P21、Bcl-2表达进行检测，现报道如下。

　　1 资料与方法

　　1.1一般资料 回顾性分析我院2014年1月至2017年1月收治的62例侵袭性骨肿瘤患者临床资料，其中男37例，女25例;年龄18—52(45.47 +1.47)岁;骨肉瘤21例，骨巨细胞瘤25例，软骨肉瘤3例，软骨母肉瘤4例，骨母细胞瘤5例，尤文肉瘤4例，其中骨巨细胞瘤、软骨母肉瘤、骨母细胞瘤为良性骨肿瘤，骨肉瘤、软骨肉瘤、尤文肉瘤为恶性骨肿瘤。纳入标准：1)病理确诊的患者;2)病情稳定的患者;3)知情同意的患者。排除标准：1)合并其他恶性肿瘤的患者;2)白血病患者;3)合并传染病患者。

　　1.2检测方法手术切除肿瘤组织，所得组织经质量分数10%中性甲醛溶液常规固定，骨标本固定经体积分数5%硝酸溶液脱钙处理，然后进行常规脱水、透明、石蜡包埋，连续切片(常规厚度)，分别进行免疫组化染色和凋亡检测。石蜡切片的制作需严格按照实验要求进行。蛋白抗体、免疫组化试剂盒及细胞凋亡试剂盒均购自上海赛默飞生物科技有限公司。

   1.3细胞凋亡的检测：检测程序需严格按照试剂盒说明书进行，原位DNA断裂位点的3’一羟基末端标记法。DAB显色，使用苏木素液轻度染色，脱水，并应用二甲苯透明，封固切片，使用已知阳性组织切片作为阳性对照。P53、P21、Bcl-2检测：切片用60℃连续烧烤3h，SABC法免疫组化染色，使用苏木素液轻度复染，脱水，二甲苯透明处理，封固切片，将已知阳性的组织切片作为阳性对照。三者均以出现黄色或棕黄色染色颗粒为阳性标准。

　　1.4统计学处理采用SPSS 21.0处理数据，年龄、，病程等计量资料采用x+s表示，比较用t检验;计数资料用百分数表示，比较用疋2检验，采用COX比例风险模型分析不同临床病理特征与相关指标表达的关系，检验水准仅=0. 05。

　　2结果

　　2.1 良恶性骨肿瘤细胞P53、P21和Bcl-2蛋白的表达P21阳性着色部位在细胞核，P53、Bcl-2阳性着色部位主要在细胞核及细胞质内，未见其他部位着色。良性骨肿瘤的细胞凋亡率(76. 310/0)高于恶性骨肿瘤(53. 28010)，差异有统计学意义(P<0.05)。良性骨肿瘤组织中.P53、P21、Bcl-2阳性表达表达率分别为66. 51%、45. 58010、0.00%，低于恶性骨肿瘤的79. 54%、72. 89%、22. 56%，差异均有统计学意义(P均<0. 05)。

　　2.2恶性骨肿瘤组织中P53、P21和Bcl-2蛋白表达与各临床病理特征关系的COX比例风险模型分析结果COX比例风险模型分析显示恶性骨肿瘤组织中P53、P21和Bcl-2蛋白表达与年龄、类型、病程、侵袭程度有关(P均<0. 05)。见表1。

　　表1 恶性骨肿瘤组织中Bcl-2蛋白表达与各临床病理特征关系的COX比例风险模型分析结果

　　3讨论

　　骨巨细胞瘤是常见的原发性骨肿瘤之一，其发生率占全部骨肿瘤的200/0”11，中国人发生率是欧美地区人群的3倍心3。该肿瘤介于良恶性之间，但局部侵袭性强，主要表现为溶骨性病变，部分良性骨巨细胞瘤可发生远处转移，具有潜在恶性，常规手术治疗复发率高。骨巨细胞瘤的病理学特征是破骨细胞样多核巨细胞和单核基质细胞并存。由于破骨细胞样多核巨细胞是骨巨细胞瘤的重要组成部分。因而很多学者认为，多核巨细胞是骨巨细胞瘤骨吸收的原因，然而在病理分级中，I级骨巨细胞瘤组织中的多核巨细胞数量多于Ⅲ级，但局部溶骨性改变比I级严重，因此，骨巨细胞瘤的溶骨性并非单一多核巨细胞作用所致，可能是多种细胞成分参与的结果。纠。近年来研究M1表明，肿瘤的发生及生物学特性与细胞凋亡有密切关系。骨细胞凋亡是恶性肿瘤普遍自发现象。目前已清楚P21蛋白与细胞信息传递有关，是癌基因突变后编码的突变，P21蛋白可使得信号系统开展，持续不断传导生长信号，导致细胞生长紊乱及肿瘤的发生，但当前相关报道较少。有研究∞1报道认为，部分骨肿瘤组织存在Ras癌基因的异常表达，84%的骨肉瘤的阳性率较高。C—myc蛋白过度表达，可能单独或与因子协同引起细胞恶性转化。良性骨肿瘤患者中未见C -myc表达。

   本文研究结果显示，恶性骨肿瘤的总细胞凋亡率低于良性骨肿瘤，表明恶性肿瘤恶性程度较高。叶彬等引研究神经母细胞瘤椎管内细胞凋亡发生，细胞凋亡多者预后较好。检测膀胱癌及乳腺癌组织中的细胞凋亡指数，发现凋亡指数高者预后较差，凋亡指数及增殖指标之间呈正相关。目前，临床只能检测一定时刻的细胞凋亡发生情况，不能连续检测，且重复检测费用较高，耗资较大，基层医院或地方医院现无此研究条件。P53突变蛋白能促进细胞恶性转化，获得癌基因功能。王玉峰等门3研究发现，P53基因异常与其蛋白高表达有关，P53蛋白随着肿瘤进程的发展而增加。P21多发生在恶性肿瘤组织中，P21基因高表达。肿瘤细胞增殖活性受组织中P21表达影响。恶性骨肿瘤组织是一种生长旺盛的增殖组织，Bcl-2阳性表达是一种良恶性鉴别辅助指标。

　　本文研究结果显示，P53、P21在恶性骨肿瘤组织中高表达，且细胞凋亡率降低，提示恶性骨肿瘤细胞快速增殖，细胞凋亡率较低，表明恶性骨肿瘤细胞在快速增殖的同时也有部分细胞在趋于凋亡;本研究只在恶性骨肿瘤中检测到Bcl-2的表达，验证了其是一种良恶性鉴别辅助指标。肿瘤细胞凋亡与增殖是一个不断变化的过程，两者之间的平衡受内外因素共同影响，目前还没有一种确切技术能准确预估细胞增殖与凋亡;无特定仪器对P53、P21、Bcl-2及凋亡指数进行追踪及检测。Kim等‘8]研究认为，P53、P21、Bcl-2等3种基因蛋白表达不均衡，这主要与肿瘤细胞的自身特性有关。COX比例风险模型分析显示恶性骨肿瘤组织中P53、P21和Bcl-2蛋白表达与年龄、类型、病程、侵袭程度有关，年龄越大、恶性程度越高、病程越长、侵袭程度越大，其P53、P21、Bcl-2表达越高。

　　综上所述，P53、P21、Bcl-2在侵袭性骨肿瘤中异常表达，且三者在良性骨肿瘤组织中的表达显著低于恶性骨肿瘤。恶性骨肿瘤组织中P53、P21、Bcl-2的表达水平与年龄、类型、病程、侵袭程度有关，这说明这些指标与侵袭性骨肿瘤的发生、发展有密切关系。

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