人DNA聚合酶β基因靶向RNA干扰重组子克隆及序列分析

Construction of "pEGFP-C1-pU6-dsRNA" recombinant for human DNA polymerase beta RNA interference

摘要：

目的克隆用于人DNA聚合酶β(DNA polymerase beta,Polβ)基因靶向RNA干扰的双链RNA(double strand RNA,dsRNA)寡核苷酸绿色荧光蛋白C1载体重组子"pEGFP-C1-pU6-dsRNA",为进一步研究人Polβ基因在环境化学污染物所致的DNA损伤修复中的作用机制作准备.方法依据Genbank中人polβ基因的cDNA序列,运用dsRNA oligonucleotide designer设计出用于RNA干扰用的dsRNA寡核苷酸序列,并以化学方法合成之.通过重组DNA技术将合成好的dsRNA克隆到含人pU6启动子的pSIREN-RetroQ逆转录病毒载体上,以此重组子转化感受态E.coli DH5α,经氨卞青霉素筛选后进行扩增,并抽提质粒.运用EcoR Ⅰ和BglⅡ消化并回收"pU6-dsRNA"目的片段,再将"pU6-dsRNA"亚克隆到pEGFP-C1上,获"pEGFP-C1-pU6-dsRNA"重组子,并进行酶切鉴定和序列分析.结果经酶切鉴定发现,"pEGFP-C1-pU6-dsRNA"载体重组子处于预期条带位置,序列分析显示与所设计的目的片段序列完全相符.结论作者克隆了用于人Polβ基因靶向RNA干扰的dsRNA绿色荧光蛋白C1载体重组子"pEGFP-C1-pU6-dsRNA",为进一步研究Polβ基因功能作好了准备.

Abstract：

doi： 10.3969/j.issn.1000-8020.2006.01.002
关键词： DNA聚合酶β RNA干扰 dsRNA 重组子基因克隆
Keyword：
作者： 胡大林 庄志雄 何云 纪卫东 唐冬生 袁建辉 方道奎 沙焱 杨建平 涂晓志 胡恭华
Author：
作者单位：中山大学公共卫生学院,广州,510080,深圳市疾病预防控制中心,佛山大学医学院
刊名：卫生研究
Journal： JOURNAL OF HYGIENE RESEARCH
年，卷(期)： 2006, 35(1)
所属期刊栏目：论著
基金项目科技部科研项目(2002CB512904)%中国科学院资助项目(39970636)
在线出版日期：
页码： 4-7

相同研究主题

相关论文（与本文研究主题相同或者相近的论文）

[1] 胡大林庄志雄何云纪卫东唐冬生袁建辉方道奎沙焱杨建平涂晓志胡恭华. 人DNA聚合酶β基因靶向RNA干扰重组子克隆及序列分析卫生研究,2006,(1):4-7.doi:10.3969/j.issn.1000-8020.2006.01.002.
[2] 李付鸾谢忠平. RNA干扰技术及其在抗HIV研究方面的应用国外医学(病毒学分册),2004,(6):165-167.doi:10.3760/cma.j.issn.1673-4092.2004.06.002.
[3] 吕新军吕志孙肖红付士红王焕琴童苏祥张松 Attoui H 梁国栋. 我国蚊虫分离的一种新型胞质多形体病毒病毒学报,2008,(6):432-437.doi:10.3321/j.issn:1000-8721.2008.06.004.
[4] 孙成三段德义于凤山于恩华徐群渊. 大鼠Fas配体基因的克隆解剖学报,2000,(2):177-179.doi:10.3321/j.issn:0529-1356.2000.02.021.

在线工具

人DNA聚合酶β基因靶向RNA干扰重组子克隆及序列分析