人IgE-Fc结构域的基因克隆、原核表达及单克隆抗体的制备
摘要：
目的：通过制备小鼠抗人 IgE单克隆抗体，为过敏性疾病的研究及诊断打下基础。方法以 CRL8033细胞的 cDNA为模板扩增人 IgE Fcε3-4段基因序列并将其连接到 pET-32a(+)载体中，转化 BL21(DE3)大肠杆菌并进行表达。然后将表达所得包涵体进行变复性，把复性所得蛋白进行亲和纯化，通过 SDS-PAGE验证纯化效果。最后将纯化的蛋白作为抗原免疫 BALB/c小鼠，经三次免疫后取小鼠脾脏细胞与 SP2/0细胞融合。用 ELISA法筛选出能结合人 IgE蛋白的阳性克隆，并应用 ELISA、Western blot等手段对杂交瘤所分泌单克隆抗体的特异性进行鉴定。结果成功构建 pET-32a(+)-IgE Fcε3-4载体并纯化 IgE Fcε3-4蛋白。用该蛋白作为免疫原免疫小鼠，成功制备了杂交瘤细胞株，其分泌的单克隆抗体能够特异性结合人 IgE蛋白，可用于 ELISA、Western blot等手段对人 IgE的检测。结论成功获得了可用于特异性检测人 IgE蛋白的单克隆抗体，为人 IgE的检测及哮喘等过敏性疾病的研究、诊断及治疗奠定了基础。
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doi：
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关键词：
免疫球蛋白 E
抗体
单克隆
过敏性疾病
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Keyword：
Immunoglobulin E
Antibodies
monoclonal
Allergy disease
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作者：
崔璐璐
毕嘉成
李俊鑫
刘绿艳
叶秀峰
郑明星
万晓春
于广
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Author：
CUI Lu-lu
BI Jia-cheng
LI Jun-xin
LIU Lü-yan
YE Xiu-feng
ZHENG Ming-xing
WAN Xiao-chun
YU Guang
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作者单位：
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刊名：
中国医药生物技术
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Journal：
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年，卷(期)：
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所属期刊栏目：
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基金项目
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在线出版日期：
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页码：