IgH重排的实时定量PCR检测及反应参数研究

摘要:

为了探讨以通用引物应用PCR技术扩增克隆性免疫球蛋白重链基因(IgH)重排的最佳实验条件及SYBRGreen Ⅰ实时定量PCR检测该基因的可行性,以通用引物对克隆性IgH重排进行扩增,对影响PCR扩增的退火温度、引物浓度、Taq酶用量、dNTP浓度、镁离子浓度、循环次数等实验因素进行了系统研究,找出最佳反应参数,并以通用引物进行了SYBR green Ⅰ实时定量PCR对IgH重排基因的检测,测定了该法检测IgH重排基因的敏感性.结果表明:最佳退火温度为60℃,最佳引物浓度为0.8 μmol/L,0.5 U的Taq酶量效果满意,最适dNTP浓度为100μmol/L,最适镁离子浓度为3.0 mmoL/L,最佳循环次数为40次.SYBR Green Ⅰ实时定量PCR可以实现对克隆性IgH重排的扩增和荧光信号的检测分析,其对IgH重排基因检测的敏感性为10 4/ml.结论:确定了应用PCR技术检测克隆性IgH重排的最适反应条件,实现了用通用引物对克隆性IgH重排稳定、特异的扩增,初步实现了以通用引物和应用SYBR Green Ⅰ实时定量PCR对IgH重排的检测.

Abstract:

  • doi:
  • 关键词: PCR IgH重排 SYBR Green Ⅰ 实时定量PCR
  • Keyword:
  • 作者: 李惠民 石岚 段勇 刘华 张学美
  • Author: LI Hui-Min Shi Lan DUAN Yong LIU Hua ZHANG Xue-Mei
  • 作者单位:
  • 刊名: 中国实验血液学杂志
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