鞭虫乳清酸蛋白TtWAP-3的原核表达、纯化及其活性研究
摘要：
目的 克隆、原核表达人鞭虫(Trichuris trichiura)乳清酸蛋白TtWAP-3,分析其生物学活性. 方法 分别以鞭虫成虫前端及尾端cDNA为模板,通过PCR扩增TtWAP-3编码基因;将TtWAP-3编码基因克隆至原核表达载体pET32a-sumo,构建重组表达质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达目的蛋白并进行Ni-NTA亲和纯化和SUMO酶酶切,用发色底物法检测rTtWAP-3对蛋白酶的抑制活性. 结果 在成虫前端及尾端均成功克隆获得TtWAP-3编码基因序列,构建的原核表达重组质粒pET32a-sumo/TtWAP-3在大肠埃希菌表达rTtWAP-3,该蛋白对人中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)和人蛋白酶3(PR3)有抑制活性,其抑制人NE(20 nmol/L)、人PR3 (200 nmol/L) 50％活性的浓度分别约为2.25 μmol/L和5.34 μmol/L. 结论 成功获得原核表达的重组TtWAP-3,该蛋白对人NE及人PR3均有抑制作用,为研究TtWAP-3对宿主的免疫调节作用奠定了基础.
-
doi：
-
关键词：
鞭虫
乳清酸蛋白
原核表达
中性粒细胞弹性蛋白酶
蛋白酶3
-
Keyword：
Trichuris trichiura
TtWAP-3
prokaryotic expression
neutrophil elastase
proteinase 3
-
作者：
李少金
邵正
司徒永立
彭礼飞
邓莉
-
Author：
LI Shao-jin
SHAO Zheng
SITU Yong-li
PENG Li-fei
DENG Li
-
作者单位：
-
刊名：
中国病原生物学杂志
-
Journal：
-
年，卷(期)：
-
所属期刊栏目：
-
基金项目
-
在线出版日期：
-
页码：