目的：药材天麻由于隶属于单子叶植物兰科天麻属，天麻中含有大量多糖、蛋白质以及大量次生代谢物质，使其提取的DNA质量不高，影响后续的PCR扩增。且ITS2通用引物在单子叶植物部分物种通用性很差。本研究通过对DNA提取过程、PCR扩增过程进行优化，设计出一对用于鉴别天麻药材的ITS2引物，为中药材天麻的鉴定提供一种新方法。方法：以通用ITS2引物扩增出的两条序列为研究对象，经Primer Premier 5.0设计出3对特异性引物，通过对22份样品进行研究，筛选出一条高特异性的ITS2引物。结果：在54益的退火温度下，TM2F-2R对天麻的鉴定效率高达90.9%。结论：TM2F-2R可作为天麻ITS2序列的特异性引物，为天麻的分子鉴定提供了一套准确、稳定的鉴定方法。