基于内参的副溶血性弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立
摘要：
目的 建立基于内参的副溶血性弧菌实时荧光定量PCR方法,快速检测样品中的副溶血性弧菌.方法 根据GenBank已公布的副溶血性弧菌基因组序列,筛选特异性靶基因,设计特异性引物探针,优化反应体系,并在体系中加入内参(IAC),通过标记不同荧光基团的TaqMan探针来监测IAC,进而实时监控整个PCR反应.按照5～50 cfu/25 g的细菌量人工污染样品,以评价所建立反应的体系.结果 以副溶血性弧菌基因组DNA为模板,最低检测限为l pg/μl;以10倍梯度稀释的菌液经水煮法提取的DNA为模板,最低检测限为4×102 cfu/ml;以舍有gyrB的质粒为模板,最低检测极限可以达到100 copies/μl;建立gyrB和gyrB-IAC标准曲线,Ct值与模板拷贝数均呈良好线性关系(r2=0.999);人工污染初始菌量为7 cfu/25 g时,样品中副溶血性弧菌增菌6h即可检出.结论 本研究所建立的gyrB-IAC实时荧光定量PCR方法,既能有效检测食品中副溶血性孤菌,又能实时监测PCR反应过程,有效防止“假阴性”的发生,结果可靠,有利于实现海产品中副溶血性孤菌实时荧光定量PCR检测方法的标准化.
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doi：
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关键词：
副溶血性弧菌
gyrB
实时荧光定量PCR
IAC
食源性致病菌
食品安全
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Keyword：
Vibrio parahaemolyticus
gyrB
real-time fluorescent quantitative PCR
IAC
foodborne pathogen
food safety
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作者：
王建昌
王金凤
李静
孙晓霞
陈瑞春
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Author：
WANG Jian-chang
WANG Jin-feng
LI Jing
SUN Xiao-xia
CHEN Rui-chun
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作者单位：
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刊名：
中国食品卫生杂志
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Journal：
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年，卷(期)：
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所属期刊栏目：
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基金项目
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在线出版日期：
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页码：