供患者行造血干细胞采集术的效果分析及采集方法的研究

　　供患者行造血干细胞采集术的效果分析及采集方法的研究

　　王 文黄晓兵

　　【摘要】 目的本研究回顾性分析供/患者造血干细胞采集动员后第1天、采集当日白细胞计数( WBC)对采集物中CD34浓度的影响，以前瞻性地根据患者个体情况制定采集方法。方法选择2016年8月至2017年12月在我院行造血干细胞采集术的85例1共/患者作为研究对象，将供/患者注射集落刺激因子剂后第1天、采集当天的WBC计数分为10×l09/L< WBC $20×l09/L,20×l09/L< WBC≤30×l09/L,WBC> 30×109/L 3组，分析每组供/患者注射动员剂后第1天以及采集当天的WBC与采集物中CD34细胞浓度之间的关系。结果注射动员剂后第1天的供/患者第1组与第2,3组采集物中CD34浓度有统计学意义(P<0.05);第2组与第3组比较差异无统计学意义(P>0.05)。采集当日供/患者白细胞计数第1组，第2组与第3组采集物中CD34浓度有统计学意义(P<0.05)。采集当日WBC> 30×l09/L供/患者采集物中CD34质量高。结论医护人员在动员采集干细胞之前，通过评判不同阶段供/患者WBC的值，可制订不同的动员方案以及采集方法，以达到大化的采集效果，提高采集成功率。

　　【关键词】供/患者;外周造血干细胞采集术;效果

　　doi:10. 3969/j. issm 1672 - 9676. 2018.16. 027

　　外周血造血干细胞移植(peripheral bIood stem ceII transplantation，PBSCT)越来越广泛地应用于血液系统肿瘤(白血病、非霍奇金淋巴瘤)、实体肿瘤、糖尿病足等疾病的治疗，是可能治愈血液系统肿瘤的唯一方法[1-4]。但采集足够的造血干细胞(peripheraI bIood stem cell，PBSC)是PBSCT成功的关键[5]。德国FreseniusKabi公司的COM. TEC血细胞分离机是通过离心作用将血液中细胞进行分离，以收集所需要的成分。本文通过对我院93例造血干细胞采集的供/患者进行动员后第1天以及采集前1 d的白细胞( WBC)计数与采集物中CD34浓度进行统计学分析，为采集者在实施采集时可根据供/患者个体差异，预评估采集物中CD34质量提供参考依据，以便为供/患者选择佳血管通路、合适参数以及采集、护理方法，现报道如下。

　　1 资料与方法

　　1.1临床资料选取2016年8月至2017年12月在我院进行造m干细胞采集的供/患者，采集未成功的患者未纳入研究，纳入标准：(1)无严重的肝肾心功能不全。(2)供受者血型相合。(3)凝血四项、免疫组合、电解质均无异常。(4)血常规WBC> 10×l09/L，血小板(PLT)> 20×l09/L，红细胞压积( Hct)≥25%。因血型不同的供者在采集时，血浆收集的量会有所不同，影响采集物的体积，从而改变采集物中CD34的浓度，因此，本研究未将其纳入。其中亲缘性健康供者35例，中华骨髓库健康供者13例，自体37例。男65例，女20例。中位年龄38岁(16~ 63岁)。体重50—68 kg。

　　1.2供/患者动员 移植前异基因供者常规做HLA配型和ABO血型鉴定，供/患者用集落刺激因子(G- CSF)5~ 10 pLg/(蚝-d)皮下射进行干细胞动员，动员后第1天及采集前ld监测外周血WBC计数，按照WBC的值分为3组：第1组10×l09/L< WBC≤20×l09/L、第2组20×l09/L< WBC≤30×l09/L、第3组WBC> 30×l09/L。动员3d后行造血干细胞采集术，采集前1 d及当天清淡饮食。供/患者采集前后PLT、Hct及产品样本PLT、红细胞(RBC)、Hct均使用全自动血细胞分析仪检测。采集的造血干细胞中的CD34+细胞数、单个核细胞( MNC)数以及细胞浓度应用流式细胞仪检测。

　　1.3 采集设备及材料 采用德国Fresenius KABI公司的COM.TEC血细胞分离机，分离耗材均使用该机器配套PIYA产品，KX -21全自动血细胞分析仪(日本sysmex公司)，流式细胞仪(美国BD公司，FACSCALIBUR)，血液保存液(四川南格尔生物科技有限公司)500~ 1000 ml，0.9%氯化钠注射液(四川科伦制药有限公司)1000 ml，以及葡萄糖酸钙注射液(天津金耀药业公司)1~2 g，16—18 G穿刺针2根(费森尤斯公司)。

　　1.4采集程序及方法采集时选择autoMNC程序，输入参数性别、身高、体重、术前红细胞压积值( Hct pre)，术前白细胞浓度( WBC pre)，术前CD34浓度均输入“10”(所有患者未测术前CD34)，全血流速40~ 70 ml/min，抗凝剂比例1：10~12，离心机转速均为默认值，分离过程中，每处理3000 ml全血，V(Cycle每循环血量)再增加20 ml，所有患者处理的血容量均不超过4倍血容量，每次不超过Sh。

　　1.5统计学处理采用SPSS 22.0统计学软件，数据为非正态分布，因此计量资料采用中位数表示，3组比较采用Kruskal- Wallis日检验。检验水准d=0.05。

　　2结果

　　2.1 肌内注射G- CSF第1天3组患者采集的终产品中CD34浓度(表1)

　　表1 3组患者采集的终产品中CD34浓度(个/ul.M)

　　经过两两比较，第1组第3组之间患者的CD34浓度水平有差异(调整后P=0. 036);第1组与第2组之间患者的CD34浓度水平有差异(调整后P=0.008);第2组与第3组之间患者的CD34浓度水平无差异(调整后P=1.000)。2.2采集当天3组之间终产品CD34浓度(.表2)

　　表2采集当天3组之间终产品CD34浓度(个/ul.M)

　　两两比较第2组与第3组之间患者的CD34浓度水平有差异(调整后P=0. 017);第1组与第2组之间患者的CD34浓度水平有差异(调整后P=O.叭1);第1组与第3组之间患者的CD34浓度水平有差异(调整后P=0.009)。

　　3讨论

　　PBSCT成功的关键是供/患者提供的CD34细胞是否足量(自体CD34剂量>2×l08/kg，异体CD34剂量>4×l08/蚝)[6]，采集物中CD34数量越多，对于患者造血及免疫系统的重建有重要的作用。在工作中，我们得出，自体与异基因采集的效果差异较大，但本研究未纳入自体采集失败的病例，将所有采集成功的病例根据WBC进行分组对比分析。

　　有研究表[7]，干细胞的动员，年龄大于60岁，PBSC动员采集效果明显变差，男性干细胞动员效果优于女性。同时，也有报道发现[8]，性别、年龄对于PBSC动员采集并无显著影响，而移植的1共/患者在选择时通常是唯一的。如何针对唯一不变的供/患者采集到质量更高、数量更多的CD34细胞非常重要。熊艺颖等[9]回顾性分析了48例非霍奇金淋巴瘤自体外周造血干细胞动员采集的影响因素分析认为，WBC和PLT可以影响干细胞动员采集成功率。动员采集的时机主要是依靠外周血中WBC来决定，以间接判断骨髓造血况[10]。

　　本研究采用WBC分类法来研究供/患者采集物中CD34的浓度，注射G - CSF后以及采集当日WBC> 30×l09/L的供/患者采集物中CD34细胞质量高。同时采用血常规作为监测指标不仅可快速准确地获取结果，而且其操作简单方便，成本低廉，具有较好的经济效益。

　　因此，一方面医师可针对在注射G - CSF第1天后WBC增殖不满意的供/患者制订不同的动员方案，以刺激粒细胞集落单位释放入外周血;另一方面，当采集当日供/患者WBC<30×l09/L，采集员可采用以下的方法提高采集效率，以收集更多的CD34细胞，利于PBSCT的顺利进行，提高移植的成功率。

　　3.1建立一条流速稳定、安全、通畅的静脉通路建立一条通畅的血管通路、保持较稳定的流量是采集的关键技术[11]。首选粗、直、大的血管以保证分离过程血流通畅，减少在分离过程中机器频繁报警导致的采集效率低下。有研究表明[12]，血管穿刺工具选择16 G留置针及中长导管置管更有利于保持流速稳定及患者的安全，减少报警次数，保证采集效果。

　　3.2保证进液管有足够的压力，减少低压报警使用心电监护仪血压计袖带进行定时松放，频率可设定为3~ 30 min，可持续、有效地保证进液管路的压力，与传统的使用压脉带加压，握弹力球，能更有效地降低对穿刺针固定的影响。

　　3.3 确保流速的情况下，可适当降低离心机的转速李清等[15]研究指出，不同离心转速对应用COM. TEC血细胞分离机行外周血造血干细胞采集有一定程度影响。COM.TEC血细胞分离机行外周血造血干细胞采集时全血流速设定为50~ 70 ml/min，不同全血流速对干细胞采集本身并无影响，但加快全血流速的同时仪器离心转速会自动提高，在全血流速设定为50~ 70 ml/min情况下转速变化范围为1500 N1750 r/min，随转速提高采集物WBC和PLT逐渐升高，而Hct、MNC及CD34+细胞比例则逐渐降低，因此应选择较低的离心转速1500 N1600 r/min。

　　3.4 给予良好的心理辅导采集之前，采集员应详细告知供/患者需要做的准备，如避免感染、进食适量早餐、穿宽松衣裤、排空大小便、置管侧手臂制动以及采集过程中可能出现的不适，使整个采集过程可顺利完成。本研究中，2例患者因为床上排尿困难，采集被迫提前结束;5例患者在采集时，未保护好穿刺针，导致血管刺破，而重新穿刺。

　　综上所述，在唯一的供/患者骨髓增殖不理想的情况下，医师可根据注射G - CSF后第1天的WBC数值进行动员方案的调整外，采集员可根据供/患者的个体差异情况来制订采集方案，选择工具，设定模式，进行健康指导，以便能大限度、大化地采集到足量的CD34细胞，为PBSCT成功争取更大的机会，提高患者的移植成功率。

　　参考文献

　　[1]Roboz GJ. Treatment of acute myeloid leukemia in older patients[J] ExpeIt Review of Anticancer Therapy,2014,7(13):285 - 295.

　　[2]闰岩，李斯丹.自体外周血造血干细胞采集时机选择及采集效果预测方法[J].中国小儿血液与肿瘤杂志，2016，21(2)：104 - 107.

　　[3]何洁琳，造血干细胞移植术后并发出血性膀胱炎的多因素研究[D].杭州：浙江中医药大学，2017.

　　[4]Horwitz SM,Zelenetz AD,Gordon LI,et al.NCCN guidelines insights:non - hodgkin's Lymphomas, version 3.2016[ Jl.J Natl Compr Cane Netw,2016 ,14(9):1067 - 1069.

　　[5]郭彩利，林欢，孙春红，等，自体外周血造血干细胞采集患者临床护理路径的实施[J].护理学杂志，2013，28( 17)：29 - 31.

　　[6]Duong K,Savani N,Copelan ED,et al.Peripheral blood progenitor cell mobilization for autologous and allogeneic hematopoietic cell transplantation:guidelines from the American Society for Blood and Marrow Transplantation[J].Biol Blood Marrow Transplant ,2014 ,20(9)：1262 -1273.

　　[7]Kumaz F,Kaynar L Peripheral blood sten cell mobilization failure[J]. Transfus Apher Sci,2015 ,53(1):31 - 40.

　　[8]魏丽，吴炜，李兰娟，等，经粒系集落刺激因子刺激外周血CD34+细胞动员效果相关因素的考察[J].国际检验医学杂志，2015，36(7)：870 -872.

　　[9]熊艺颖，刘林，唐晓琼，等.48例非霍奇金淋巴瘤患者自体外周造血干细胞动员采集的影响因素分析[J]重庆医学，2017，46( 24)：3328 - 3331.

　　[10]孙巍，高敏，谢嵘，等.151例淋巴瘤外周血造血干细胞采集影响因素分析[J].中国实验血液学杂志，2016，24(2)：416 -421.

　　[11]Pierelli L,Perseghin P,Marchetti M,et al.Best practice for peripheral blood progenitor cell mobilization and collection in adults and children:results of a Societa Italiana Di Emaferesi e Manipolazione Cellulare( SIDEM) and Gruppo Italiano Trapianto Midollo Osseo( GITMO) consensus process[J].Transfusion, 2012 ,52(4):893 -905.

　　[12]陈瑾，郭彩利，孙春红，等，采用不同血管通路采集自体外周血造血干细胞的安全性及有效性评估[J].现代检验医学杂志，2015，30(4)：111 - 115.

　　[13]刘淑萍，周哗敏.16CB浅静脉留置针在血细胞分离机中的应用[J].中国输血杂志，2017，30(9)：1061 -1063.

　　[14]赵晓茜，濮益琴，两种不同采集方式在造血干细胞移植患者中的应用[J].齐鲁护理杂志，2018，24(3)：92 -94.

　　[15]李清，廖和东，蒋迷，等.一种血细胞分离机不同转速对外周血造血干细胞采集的影响[J].中国输血杂志，2017，30(2)：188 -190.