灯盏花素软袋大输液质量标准研究

　　灯盏花素软袋大输液质量标准研究

　　汤秀梅，刘丹，赵娟，张煌，丁江生

　　(云南省药物研究所/云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室/云南白药集团创新研发中心，云南昆明650100)

　　摘要：目的建立灯盏素软袋大输液的质量标准。方法高效液相色谱法测定该制剂中野黄芩苷的含量进行质量检查;并测定其PH值，渗透压，不溶性微粒。结果采用以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱;以乙腈-0. 1%磷酸(18:82)为流动相，流速1.0 mU min，检测波长335 nm。野黄芩苷的线性范围为16pug/mL—400yg/mL(r=0.9999)，平均回收率为100. 2%。结论 建立的灯盏花素软袋大输液的质量标准，其含量测定方法简便，可控，可用于灯盏花素大输液的质量控制指标。

　　关键词：灯盏花素软袋大输液;质量标准;高效液相色谱法

　　中图分类号：R927. 11 文献标志码：A 文章编号：1007 - 2349( 2018) 09 - 0065 - 03

　　灯盏花素软袋大输液是以灯盏花素为原料制成的注射剂。灯盏花素具有活血化瘀，通经活络的功能。用于脑络瘀阻，中风偏瘫，心脉痹阻，胸痹心痛;中风后遗症及冠心病心绞痛证候者。注射给药不经胃肠道，故不受消化系统及食物的影响，直接进入循环系统或组织、器官内，具有吸收快，作用迅速的特点。对研制的灯盏花素软袋大输液，研究控制其质量，建立质量标准。

　　1材料

　　1.1 仪器Agilent 708 - DS自动溶出仪;Agilent 1200高效液相色谱仪;BSA224s.cw电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司);CPA225D电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司);Y2360DB超声仪(上海越众仪器设备有限公司);

　　1.2试药甲醇(色谱纯，默克公司);其余为分析纯;野黄芩苷对照品(购于中国食品药品检定研究院，批号110842 -201207)，灯盏花素软袋大输液(批号：20151019，20151020，20151021，云南省药物研究所提供)。

　　2方法与结果

　　2.1鉴别取供试品液，用紫外一分光光仪进行波长扫描，在(284 +2) nm和(335 +2) nm的波长处有大吸收。2.2 pH值使用酸度计测定，用纯化水冲洗电极，擦干。电极放入待测溶液中，读数。每批样分别测定3次。

　　2.3装量差异取供试品3袋，开启时注意避免损失，将内容物转移至干燥500 mL量筒中倒置15 min，尽量倾净。读出每个容器内容物的装量，并求其平均装量，均应不少于标示装量的97%。

　　2.4可见异物取供试品20袋，除去容器标签，擦净容器外壁，必要时将药液转移至洁净透明的适宜容器内，置供试品于遮光板边缘处，手持供试品颈部轻轻旋转和翻转使药液中可能存在的可见异物悬浮(但应避免产生气泡)，轻轻翻摇后即用目检视，重复3次，均不得检出明显可见异物。

　　2.5不溶性微粒取供试品，用水将容器外壁洗净，小心翻转20次，使溶液混合均匀，小心开启容器，先取出部分供试品溶液冲洗取样杯，再将供试品溶液取出置取样杯中，开启搅拌，使溶液均匀，每个供试品依法测定至少3次，每次取样应不少于5 mL，记录数据，弃第1次测定数据，取后续测定数据的平均值作为测定结果。

　　2.6渗透压摩尔浓度取适量新沸放冷的水调节仪器零点，然后由表中选择两种标准溶液(供试品溶液的渗透压摩尔浓度应介于两者之间)校正仪器，再测定供试品溶液的渗透压摩尔浓度。

　　2.7含量测定

　　2.7.1 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0. 1%磷酸(18:82)为流动相;柱温为35'C;流速为每分钟1 mL。理论板数按野黄芩苷峰计算不低于4000。

　　a·空白

　　b.对照

　　c.样品

　　图1 灯盏花素软袋大输液中野黄芩苷色谱图

　　2.7.2对照溶液的制备取野黄芩苷对照品，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每ImL中含80yg的溶液，作为对照品分别测定野黄芩苷含量，测定结果显示重复性好，相对标准偏差为0.79%溶液。

　　2.7.3供试品溶液取约2 mL样品，用0.45 l_cm滤头过滤，得供试品溶液。

　　2.7.4空白溶液取约2 mL空白样品，用0.45 pdm滤头过滤，得空白溶液。

　　2.7.5线性关系考察试验精密称取野黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得对照品母液(0. 808 mg/mL)，精密吸取对照品母液5 mL、l mL、1 mL、1 mL、1 mL分别置10 mL、5 mL、10 mL、25 mL、50 mL的容量瓶中，用甲醇并定容至刻度，摇匀。精密吸取5 yL，分别进样，以浓度(X)对峰面积(Y)进行线性回归，得回归方程y=16328. 5146x - 76. 6416，r=0.9999，表明灯盏花素在16~ 400yg/mL围内呈良好的线性关系。

　　2.7.6重复性试验取同一批供试品，分别取出6份，滤过，

　　2.7.7稳定性试验取供试品溶液适量，滤过，室温放置，分别于Oh、th、3h、6h、9h、12 h、18 h、24 h进样测定，24 h无显著性变化，供试品较为稳定，相对标准偏差为0. 94%。

　　2.7.8准确度试验精密称取野黄芩苷对照品10 mg至50 mL量瓶中，加甲醇溶解，稀释至刻度，作为对照储备液;分别精密量取5 mL样品置10 mL量瓶中9份，每3份分别加入对照储备液1 mL、2 mL、3 mL，用甲醇稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得供试品溶液;另取上述对照储备液用甲醇稀释并制成每1 mL含0.08 mg的溶液，摇匀，即得对照品溶液。取上述对照品溶液和供试品溶液，分别进样，按外标法计算，即得，实验结果回收率98% ~101%之间，平均值100. 2%。

　　2.7.9 中间精密度3位不同人员对同一批供试品分别测定野黄芩苷，测定结果分别为，0.0794 mg/mL，0.0791 mg/mL，0. 0795 mg/mL，相对标准偏差1.76%。

　　2.7. 10 耐用性实验 分别改变色谱条件中的流速为0.8 mL/min,1.0 mL/min,1.2 mL/min;柱温：25℃,300C,40。C;流动相：乙腈-0.1%磷酸(20:80)，乙腈-0.1010磷酸(18:82)，乙腈-0. 1010磷酸(16：84)柱子：Ecosil - C18，Kroma-si 100 -5 C18，Agilent Zorbax SB - C18，分别进样供试品液、对照品溶液，试验结果显示，测定条件有小的变动时，所用溶剂和辅料对溶出检测结果无影响，野黄芩苷峰分离度均1.5以上。

　　2.7. 11 3批样品的检测结果见表1。

　　表1 3批样品检测结果

　　批号 性状 喜萋嚣可见异物不(mL)粒麒mOsm) (mg/mL)

　　(mL) 浓度(mOsm)(n∥mL)

　　3讨论

　　3.1 pH值可见异物、不溶性微粒，摩尔渗透压等为控制中药注射剂质量的重要指标，对灯盏花素软袋输液的这些指标均进行研究，并列入质量标准中。

　　3.2色谱条件研究参照《中国药典》2010年版一部的灯盏花素含量测定色谱条件，流动相甲醇-0. 1%磷酸(40:60)，流速1.0 mL/min，检测波长335 nm。进供试品得到的野黄芩苷色谱峰有前沿峰，对称性不好，影响积分基线，会导致峰面积不准确，而检测结果也不准确。调整流动相，乙腈-o.la/o磷酸( 18：82)，野黄芩苷色谱峰峰形对称性好，分离度1.5以上，确定色谱条件流动相为乙腈-0.1%磷酸(18: 82)，流速1.0 mI/mm，柱温30qC，检测波长335 nm。

　　参考文献

　　[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2015.

　　[2]国家药典委员会，中华人民共和国卫生部药品标准[s].

　　[3]邵鑫，周洁，姚武灯盏花素片中灯盏乙素含量的HPLC法测定[D].黄山学院学报，2012，(14)：53 - 54.