苦胆草片含量测定的方法学验证

　　苦胆草片含量测定的方法学验证

　　王玲芬1，郑 梅2

　　(1.云南滇中药业有限公司，云南玉溪653100;2.昆明医科大学第二附属医院，云南昆明650100)

　　摘要：目的对苦胆草片中龙胆苦苷的含量测定方法进行验证。方法 反相高效液相色谱法。色谱柱为Agilent TC - C18(150 mm×4.6 mm，5 um)柱，流动相为甲醇一水(25：75);柱温为300C;检测波长为270 nm，流速为0.8 mL/min。结果龙胆苦苷在0. 0508 mg/mL~0.3556mg/mL范围内有良好的线性关系，r=0.999909，平均加样回收率为101. 20/o，RSD=1.2U/o(n=9)。结论 该法分离效果好，结果准确、可靠，苦胆草片含量测定的方法可行。

　　关键词：苦胆草片;龙胆苦苷;含量测定;高效液相色谱法

　　中图分类号：R927.2 文献标志码：A 文章编号：1007 - 2349( 2018) 07 - 0074 - 03

　　苦胆草片在原标准糖衣片(《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第八册(WS3 -B-1555 - 93)[1]的基础上增加薄膜衣片，薄膜衣片具有生产周期短(3—4 h)、用料少、衣片增重小(小于3%)、衣层机械强度及抗湿：热性好，对药物的崩解影响小以及制剂色泽稳定、美观等优点。现上市的剂型苦胆草片(糖衣片)(WS3 -B- 1555 - 93)，无含量测定项，笔者认为不足以控制本品的质量，由于本品中仅由坚龙胆一味药材制成，通过参照《中国药典》2010年版一部[2-3]龙胆药材项中坚龙胆的[含量测定]项和《中国药典》2010版第一部(附录XⅧA)中药质量标准分析方法验证指导原则，对苦胆草片的含量测定方法进行验证。

　　1 仪器、试药和试剂

　　1.1仪器高效液相色谱仪：型号：岛津LC - 2010AHT SHI-MADZU(包括输液泵、自动进样器、UV - Vis检测器、CLASS -VP色谱工作站);电子天平：型号：BP211D Sartorius。

　　1.2试药和试剂样品预处理：所用试剂均为分析纯，高效液相分析所用甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水;对照品：龙胆苦苷中国药品生物制品检定所编号：110770 - 200712;样品：云南滇中药业有限公司生产的苦胆草片批号：20100101、20100102、20100103

　　2 实验方法

　　2.1 色谱条件色谱柱：Agilent TC - C18 5um色谱柱(4.6×150 mm);流动相：甲醇一水(25:75);柱温：30C;检测波长：270 nm;流速：0.8 mL/min;进样量：10 uL;理论塔板数按龙胆苦苷峰计算应不低于3000。

　　2.2对照品贮备溶液的制备精密称取在五氧化二磷干燥器中干燥12 h龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，即得。

　　2.3供试品溶液的制备取本品20片，除去薄膜衣，精密称定，研细，取0.3 g，精密称定，精密加入甲醇20 mL，称定重量，加热回流15 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液备用，精密量取续滤液2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

　　3方法学考察

　　3.1 线性关系考察精密吸取对照品贮备溶液1 mL，2 mL，3 mL，4 mL，5 mL、6 mL、7 mL置10 mL容量瓶中，分别加甲醇稀释至刻度，配制成系列浓度的对照品溶液：A:龙胆苦苷0. 0508 mg/mL;B：龙胆苦苷0.1016 mg/mL;C：龙胆苦苷0. 1524 mg/mL;D:龙胆苦苷0.2032 mg/mL;E：龙胆苦苷0. 2540 mg/mL;F：龙胆苦苷0.3048 mg/mL;G:龙胆苦苷0. 3556 mg/mL;在上述“色谱条件”下，测定峰面积，以对照品浓度作横坐标(X)，峰面积作为纵坐标(Y):线性回归方程Y=4.9906e - 008X -o.00094586，r=0.999909(n =7);表明龙胆苦苷在o.0508mg/mL~0. 3556mg/mL范围内具有良好的线性关系。(见表1)

　　表1 线性关系考察表

　　《中国药典》2010年版一部坚龙胆项下[含量测定]规定：坚龙胆按干燥品计算，含龙胆苦苷不得少于1. 5%，以苦胆草片处方中坚龙胆处方量以完全不损失计，制成的成品中每片含龙胆苦苷的量为6. Omg，考虑到龙胆苦苷具有一定的挥发性及在制法过程之中的损失，且药材的产地、采收、加工等因素。将苦胆草片中每片含龙胆苦苷的含量以70%计，总量确定为不得少于2. Omg(即每片含坚龙胆以龙胆苦苷计，不得少于2. Omg)。

　　4结论

　　结果表明苦胆草片[含量测定]项的方法，分离效果好，结果准确可靠，此方法是可行的。坚龙胆为苦胆草片中的主药，其主要成分为龙胆苦苷，本实验有机溶剂进行提取，使所要测定的龙胆苦苷很好的分离。坚龙胆来源于龙胆科植物滇龙胆Gentiana rigescensFranch的干燥根和根茎。含量测定法有内标法、外标法。自身对照法，面积归一化法，实验选用的是外标法，测定出对照品和供试品的峰面积，再对供试品的含量进行计算。苦胆草片中只有坚龙胆一味药，生产工艺采用一半药材粉碎和一半提制膏，在生产过程的每一步骤，龙胆苦苷下降，故将苦胆草片中每片含龙胆苦苷的含量以70010计，总量确定为不得少于2.Omg。

　　参考文献：

　　[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.《中华人民共和国卫生部药品标准》，中药成方制剂[s].1998.

　　[2]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(一部)[M].北京：中国医药科技出版社，2010.