Aptima HPV E6/E7mRNA技术检出宫颈癌及癌前病变的临床效果研究

　　Aptima HPV E6/E7mRNA技术检出宫颈癌及癌前病变的临床效果研究

　　李莉 王林 李志芳 李婷媛 乔友林

　　【摘要】目的评估Aptima HPV E6/E7 mRNA检测技术在宫颈癌筛查人群和临床就诊患者中检出宫颈癌及癌前病变的效果。方法选取我国山西省长治市3个三甲医院参加宫颈癌筛查的21～70岁妇女及门诊病人共557人作为研究对象，采用液基细胞学( LBC)与HPV E6/E7 mRNA检测技术对宫颈细胞学标本进行检测，以病理学结果作为诊断金标准，评价两种方法检测宫颈癌及癌前病变的临床效果。结果HPV E6/E7 mRNA阳性率随着细胞学和病理病变级别的升高而升高。在CrN2+/CIN3+中，HPV E6/E7 mRNA检测的灵敏度与特异度均高于LBC检测;HPV E6/E7mRNA检测的ROC曲线下面积均大于LBC检测。结论 HPV E6/E7 mRNA检测宫颈癌及癌前病变酊能力相比于LBC检测更具优越性。

　　【关键词】HPV E6/E7 mRNA;液基细胞学(LBC);官颈上皮内瘤变( crN)

　　宫颈癌是危害全球女性健康和生命的主要恶性肿瘤之一。GLOBOCAN 2012统计数据显示，全球每年约有52.8万新发病例，其中90010病例来源于发展中国家[1-2]。近十几年来我国官颈癌的发病率和死亡率逐年升高。新数据显示，2015年我国新发官颈癌9.9万例，占女性肿瘤的5.6%，如不采取有效防治措施，预计到2050年我国官颈癌新发病例将有可能增加至18.7万例。宫颈癌的防控是我国目前面临的重要的公共卫生问题。自1943年Traut发表了巴氏涂片在官颈癌诊断方面的应用价值之后，全球范围内展开了以细胞学为主的官颈癌筛查，在此之后官颈癌的发病率与死亡率均明显下降。液基细胞学( LBC)检测是我国目前常用的官颈癌筛查方法之一。但有数据显示细胞学诊断只能发现50u/o～740/0左右的官颈病变，漏诊率较高且易出现模棱两可的结果，尤其是在发展中国家[6-8]。高危型人乳头瘤病毒( human papillomavirus，HPV)持续感染是宫颈癌及癌前病变发生的主要病因，在官颈癌筛查中具有一定的应用价值[9-10]。201 1年美国食品和药品管理局( FDA)批准了Aptima HPV作为唯一针对高危型HPV E6/E7 mRNA的检测方法，逐渐被应用于宫颈癌的筛查中，国内在这方面的应用报道较少。本研究将开展以医院为基础的横断面研究，通过与LBC诊断相对比，评价Aptima HPV E6/E7 mRNA检测检出官颈癌及癌前病变的临床效果，探讨其作为我国官颈病变筛查手段的作用及意义。

　　材料与方法

　　一、研究对象

　　2016年9月至2017年5月，从山西省长治市长治医学院附属和平医院、长治市人民医院、长治医学院附属和济医院3个三甲医院招募参加宫颈癌筛查的妇女及门诊患者且满足人选标准的557例妇女作为研究对象，人选标准：①年龄在21～70周岁;②签署知情同意书;③除外妊娠;④无官颈手术史。排除标准：不符合上述任何人选条件之一者。

　　二、临床检查和样本收集

　　对符合入选标准的研究对象，由经过统一培训的妇科医生进行妇科检查后，填写病例报告表，然后进行标本采集，标本在15～30℃保存在PreservCyt瓶中，定期送往中心验室进行检测。

　　三、LBC检测

　　使用ThinPrep 2000处理器制备细胞学玻片，根据TBS分类系统报告结果。具体分类如下：未见上皮内病变细胞( NILM)和恶性病变细胞、不能明确意义的非典型鳞状细胞( ASC-US)、非典型腺细胞( AGC)、非典型鳞状细胞不能除外高度上皮内病变( ASC-H)、鳞状上皮内低度病变( LSIL)、鳞状上皮内高度病变(HSIL)、鳞状细胞癌( SCC)、原位腺癌(AIS)、腺癌(ADC)。

　　四、HPV E6/E7 mRNA检测

　　使用全自动核酸检测系统PANTHER( Hologic)进行检测，操作过程严格按照操作说明书进行。该方法可用于定性检测14种HPV型别的E6/E7病毒信使RNA( mRNA)，但不能区分具体型别。14种型别包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68型。检测程序主要包括在一只试管中进行的三个步骤：分别为靶标捕获、靶标扩增及杂交保护反应。试剂盒包含一种内部质控品(IC)，用来监测核酸的捕获、扩增和检测情况以及操作员或仪器出现的错误。

　　五、病理诊断

　　病理诊断由三家医院病理科医生在未知其他检测结果情况下完成，采用CIN命名系统，结果包括：阴性、CIN1、CIN2、CIN3、微小浸润癌、鳞状细胞癌、原位腺癌和腺癌。病理诊断CIN2+的玻片需由中国医学科学院肿瘤医院病理科专家进行复阅。

　　六、统计分析

　　采用SPSS 17.0软件进行统计分析。计数资料以百分比或构成比描述，组内比较采用线性卡方检验，组间差异性比较采用卡方检验，P< 0.05为差异有统计学意义。两种检测方法ROC曲线下面积差异用MedCalc软件进行分析。

　　结 果

　　一、研究对象基本特征

　　本研究共计人组557名研究对象，平均年龄为44.8±9.6岁。其中15例因细胞学结果不满意而被剔除，终纳入分析的有效例数为542例。研究对象基本特征，见表1。

　　表1 研究人群的基本特征

 　　二、不同细胞学及病理级别中HPV E6/E7mRNA与LBC阳性率的比较

　　在细胞学诊断正常人群中，HPV E6/E7 mRNA检测的阳性率为13.8010，ASC-US人群中的阳性率为16.5 010.LSIL的人群中HPV E6/E7 mRNA检测的阳性率为87.2%，在HSIL中为96.7%，在SCC中为100.0%.HPV E6/E7 mRNA阳性率随着细胞学病变级别的增高而增高( X2= 214.261，P= 0.000);随着病理级别的增高，HPV E6/E7mRNA阳性率与LBC阳性率均有增高的趋势，且差异有统计学意义，HPV( X2=152.165，P=O.OOO)，LBC( X2= 79.454，P= 0.000)，见表2。

　　表2不同病理级别中HPV E6/E7 mRNA与LBC阳性率的比较(口，%)

　　注：*LBC阳性为诊断为ASCUS及以上

　　三、LBC与HPV E6/E7 mRNA对CIN2+/CIN3+检出的灵敏度与特异度比较

    HPV E6/E7 mRNA检测对CrN2+及CIN3+检出的灵敏度与特异度均高于LBC检测，见表3。

　　表3 细胞学与HPV E6/E7 mRNA检测对CIN2+及CIN3+检出的灵敏度及特异度比较

　　四、LBC与HPV E6/E7 mRNA对CIN2+/CIN3+检出的ROC曲线下面积比较

　　LBC对CIN2+检出ROC曲线下面积为0.736( 0.689~0.859)，HPV E6/E7 mRNA检钡4为0.819( 0.779~0.859)：HPV E6/E7 mRNA检测的ROC曲线下面积大于LBC检测(2=4.784, ~0.000)0 LBC对CIN3+检ROC曲线下面积为0.706( 0.652~0.761),HPV E6/E7 mRNA为0.796( 0.751~0.841); HPVE6/E7 mRNA检测的ROC曲线下面积大于LBC(Z= 4.892,仁0.000)。如图1和2。

　　图1LBC与HPV E6/ E7mRNA检测对CIN3+检出的ROC曲线

　　图2 LBC与HPV E6/E7mRNA检测对CIN2+检出的ROC曲线

　　讨 论

　　宫颈癌筛查的目的是找出高风险人群。然而以LBC检查为基础的宫颈癌筛查也具有一定的局限性：虽然目前制片技术不断革新，但人为主观因素如医生的诊断水平等的存在仍然对细胞学的诊断产生了一定的影响。Schiffman等[11]的一项研究发现，针对于质控后的ASC-US细胞学玻片，原始诊断的符合率只有43%，对于HSIL及以上的符合率也只有47 010，意味着有50u/o以上女性将在原始诊断时被漏诊或误诊。一个优秀的细胞学医生往往需要长时间的专业培训。因此在我国资源匮乏地区很难建立起以细胞学为主的行之有效宫颈癌筛查体系。相比于LBC，高危型HPV检测拥有更好的灵敏度[12]，HPV E6/E7 mRNA检测相比于DNA检测，与临床相关的HPV感染关联更为密切[13-14]。

　　大量研究表明，HPV E6/E7mRNA的表达与官颈病变严重程度相关[14-16]。本研究中HPV E6/E7 mRNA阳性率随着LBC及病理病变级别的升高而升高，证实了HPV E6/E7mRNA与细胞学病变及病理病变严重程度呈正相关。CIN2、CIN3和官颈癌中的HPV阳性率明显高于正常组和crNl组，也说明这种检测方法在筛查高级别官颈病变方面更具优势。

　　本研究显示，HPV E6/E7 mRNA检测对CIN2+及CIN3+的检出的灵敏度均高于LBC且差异有统计学意义，说HPV E6/E7 mRNA检测能够检出更多的官颈高级别病变，与夏作利、Sorbye等[15,16]研究符合。但本研究中HPV E6/E7 mRNA检测的特异度高于LBC检测，与国内外的研究结果均不一致[15,17]，究其原因除了HPV E6/E7 mRNA检测本身的特异度就高，排除可疑或低度病变的能力更强，可能还归咎于本研究人群来源于机会性筛查人群，既有体检人群纳入又有门诊病例，对特异度产生了影响。HPV E6/E7mRNA检测的总体阳性率为41.10/0，低于LBC的47.1u/o。通过ROC曲线分析HPV E6/E7 mRNA检测在对CIN2+及CIN3+ROC曲线下面积均大于LBC检测，说明在本研究中HPV E6/E7 mRNA检测的拥有更好的准确性相对更高，提示HPV E6/E7mRNA检测用于宫颈癌的初筛，提高筛查效果。LBC要通过细胞学制片、染色、封片等一系列复杂的过程才能由医生进行结果判读，诊断依赖于人的主观判断、费时费力，而HPV E6/E7mRNA检测由机器产生自动客观的判读结果，每天可完成500～1000例的标本检测，结果准确、高效，但费用较为昂贵。

　　综上所述，HPV E6/E7mRNA检测作为一种高效、便捷且操作简单的检测方法，可适用于大规模临床官颈病变筛查，筛查出宫颈癌及癌前病变的能力相比于LBC检测更具优越性，但该结果仍需要在以人群为基础的大规模筛查研究中进一步验证，外推需谨慎。

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