网状蛋白Nogo-B在子痫前期胎盘组织中的表达及其与病情相关分子表达的相关性

　　网状蛋白Nogo-B在子痫前期胎盘组织中的表达及其与病情相关分子表达的相关性

　　李秀娟，曾娟，郑雪绒，赵欣媛西安医学院第二附属医院，陕西西安710038

　　摘要：目的分析网状蛋白Nogo-B在子痫前期胎盘组织的表达情况及其与病情相关分子表达的关系，以探讨其在子痫前期发生发展过程中的作用机制。方法选取2015年1月-2017年10月在西安医学院第二附属医院分娩产妇的胎盘组织为标本。其中75例子痫前期产妇为子痫组，35例正常妊娠产妇为正常组。检测并比较两组网状蛋白Nogo-B浓度、凋亡基因的mRNA浓度及炎症因子和内皮损伤分子的浓度，并分析各因子与Nogo -B的相关性。结果子痫组Nogo -B的mRNA浓度显著高于正常组，差异均有统计学意义(P<0.05)。子痫组不同亚组的Nogo-B表达量比较：重度子痫组显著高于中度子痫组及轻度子痫组，中度子痫组高于轻度子痫组，差异均有统计学意义(均P<o. p="" 网状蛋白nogo-b表达与子痫前期发病和严重程度密切相关，其主要借助调节内皮损伤分子、凋亡基因、炎症因子的生成来参与子痫前期的发生发展过程。<="" -b的mrna与il-1p、il-8、il-6、tnf-a、vcam-1、cd40l、ox-ldl、lox-1、adm、ptx3的浓度呈正相关关系。结论="" -3、fas的mrna浓度呈正相关关系。子痫组炎症因子il-1[3、il-8、il-6、tnf-a、vcam-1、cd40l的表达显著高于正常组(p<0.05)，且子痫组内皮损伤分子ox-ldl、lox-1、adm、ptx3的表达显著高于正常组(p<0.05)，子痫组nogo="" -9、caspase="" 05)。子痫组nogo-b的mrna与caspase="" 05)。子痫组caspase-9、caspase-3、fas的mrna浓度显著高于正常胎盘组织，差异均有统计学意义(均p

　　关键词：Nogo-B;子痫前期;凋亡基因;内皮损伤分子;炎症因子

　　中国图书分类号：R714. 245文献标识码：B文章编号：10014411( 2018) 11-2578 -03;doi：10. 7620/zgfybj.j.issn.1001-4411. 2018. 11. 59

　　子痫前期对妊娠期母儿的健康威胁较大，其中重度子痫期极容易损伤重要终末器官功能，严重者甚至对母儿生命安全造成威胁[1-2]。子痫前期的发病原因目前尚未完全明确，多认为胎盘病理生理改变引发的全身血管内皮细胞损伤系其病发起源。而子痫前期的发病机制也尚未阐明，目前学界认为其可能与免疫适应不良、遗传易感性、胎盘缺血等原因密切相关[3-4]。子痫前期的病理基础为血管内皮细胞损伤，而造成这类损伤往往包括细胞凋亡过度、炎症反应激活等诸多环节，围绕这些环节分析病理分子的作用，有助于阐明子痫前期的发病机制[5-7]。网状蛋白Nogo分为Nogo -A、Nogo -B、Nogo -C等亚型。其中Nogo -B表达为广泛，在多个组织中均有表达，其广泛参与了细胞凋亡、内皮损伤等过程的调控。有报道[9 3推测其可能借助损伤内皮细参与子痫前期的发生。本研究以2015年1月-2017年10月在西安医学院第二附属医院分娩产妇的胎盘组织为标本，探讨网状蛋白Nogo-B在子痫前期胎盘组织中的表达情况及其与病情相关分子表达的相关性。

　　1资料与方法

　　1.1 一般资料选取2015年1月-2017年10月在本院分娩产妇的胎盘组织为标本。其中子痫前期产妇75例为子痫组，平均孕周( 37. 18 +3. 76)周，包括重度子痫前期(重度子痫组)、中度子痫前期(中度子痫组)、轻度子痫前期(轻度子痫组)各25例;正常妊娠产妇35例为正常组，平均孕周( 37. 67±3. 84)周。本研究获得医院伦理委员会批准，所有研究对象对本研究知情同意并签署知情同意书。在产妇分娩后即采集适量胎盘组织，生理盐水冲洗干净后用滤纸吸干，行冷冻保存待测。

　　1.2检测方法

　　1.2.1 试剂 酶联免疫吸附( ELISA)试剂盒为Roche公司生产，荧光定量试剂盒、RNA提取和反转录试剂盒均为TAKARA公司生产，PCR仪和酶标仪均为Biorad公司生产，而BCA蛋白定量试剂盒为碧云天公司生产。

　　1.2.2基因mRNA表达量检测 充分研磨胎盘组织后，严格按说明步骤操作，用RNA提取和反转录试剂盒进行实验得到CDNA;用PCR试剂盒进行反应，扩增Nogo -B、Caspase -9、Caspase -3、Fas并计算mRNA浓度。

　　1.2.3 内皮损伤分子和炎症因子浓度检测 充分研磨胎盘组织后，严格按各说明步骤操作，用BCA试剂盒计算所取组织中的蛋白总浓度，用ELISA试剂盒检测IL -1 B、11-8、11-6、TNF -a、VCAM -1、CD40L等蛋白浓度，计算待测组织中每毫克总蛋白中目标蛋白的水平。

　　1.3统计学分析数据处理运用SPSS 22.0统计学软件，计量资料以(i±s)表示，数据比较采用f检验，采用Pearson检验进行相关性分析，P<o. p="" 05为差异有统计学意义。

　　2结果

　　2.1 各组Nogo -B的浓度比较 子痫组Nogo -B的mRNA浓度(0.712±0.055)显著高于正常组(0. 526+0. 073)，差异有统计学意义(拉6.114，P<0. 05)。子痫组不同亚组的Nogo -B表达量比较：重度子痫组(0. 823±0.109)显著高于中度子痫组(0. 735+0. 087)及轻度子痫组(0.647 +0. 027)，差异有统计学意义(t=5. 124、4.328，P<o. p="" 05)。<="" 976，p

　　2.2子痫组凋亡基因的浓度及其与Nogo -B的相关性 子痫组Caspase -9、Caspase -3、Fas的mRNA浓度(0. 331+0. 037,4.423 +0. 052、2.812 +0. 471)显著高于正常胎盘组织(0. 186+0. 035，0.291+0. 049，1. 593+0. 534)，差异均有统计学意义(扣5.785、6. 526、6.005，均P<o. p="" 05)。<="" -9、caspase="" 702、0.743、0.811，均p

　　2.3 两组炎症因子的浓度及其与Nogo -B的相关性子痫组炎症因子IL-1(3、IL-8、IL-6、TNF -仅、VCAM-1、CD40L的表达水平显著高于正常组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。子痫组Nogo -B的mRNA与IL-1[3、IL-8、IL-6、TNF-a、VCAM-1、CD40L的表达呈正相关关系(r=0.657、0.729、0. 799、0.781、0.765、0.719，均P<o. p="" 05).

　　表1两组炎症因子的表达水平比较(x+.s，pg/ml)

 　　2.4两组内皮损伤分子的浓度及其与Nogo -B的相关性见表2。

　　表2两组内皮损伤分子的表达水平比较(x+s，yg/L)

　　组别 例数 OX-LDL LOX-1 ADMPTX3

　　正常组

　　子痫组

　　￡值

　　P值

　　35 125. 86+17. 52 149. 58121. 63 168. 82+21. 53 70. 25+6. 39

　　75 2?:0. 53+?D. 56 281. 10+25. 34 3V. 1l.+l.9. 47 1?:0. 11+5. 36

　　3.111 3.526 4.323 4.152

　　<0. 05 <0. 05 <0. 05 <0. 05

　　子痫组内皮损伤分子OX-LDL、LOX-1、ADM、PTX3的浓度显著高于正常组，差异有统计学意义(P<0.05)。子痫组Nogo -B mRNA与OX -I.DL、LOX-1、ADM、PTX3的表达呈正相关关系(r=0. 793、0.682、0.737、0.686，均P<o. p="" 05).

　　3讨论

　　子痫前期的发病原因和发病机制尚未完全明确，学界多认为胎盘病理生理改变引发的全身血管内皮细胞损伤系其病发起源，而造成血管内皮细胞损伤往往包括细胞凋亡过度、炎症反应激活等诸多环节。

　　正常妊娠过程中，血管内皮细胞可分泌血管活性物质，以调节血管舒缩;而在子痫前期发病过程中，胎盘组织会发生血管重塑障碍，局部组织持续缺氧缺血则会导致内皮损伤，使得血管活性物质无法有效分泌及合成，并引发微血栓及血管痉挛，导致胎盘缺氧缺血状态的继续加重[10]。

　　相关报道发现，Nogo -A主要表达于中枢神经系统，Nogo -C则主要表达于骨骼肌。而Nogo -B则表达于多个组织中，如胎盘、肝脏、神经组织等，亚细胞定位于细胞膜及内质网，其可调控炎症反应、内皮损伤、细胞凋亡等[ll-12]。子痫前期的重要病理特征就是内皮损伤，而Ngo-B又被证实参与调控内皮损伤，故而，我们可推测Nogo-B可能参与了子痫前期的发病过程。

　　在本组研究中，先就正常及子痫前期胎盘组织中的Nogo -B水平进行了横向比较，发现子痫组的Nogo -B的mRNA浓度显著高于正常组(P<0.05)。子痫组不同亚组的Nogo -B表达量比较显示：重度子痫组显著高于中度子痫组及轻度子痫组，中度子痫组高于轻度子痫组(均P<o. p="" -b在子痫前期胎盘组织中的表达异常且与子痫前期的病情严重程度存在密切关系。细胞凋亡过程是一种程序化细胞死亡，线粒体途径和死亡受体途径调控着细胞凋亡。相关报道指出，Fas可调控死亡受体途径的细胞凋亡，而Caspase -9、Caspase-3则是线粒体途径和死亡受体途径下游的执行分子[15]。研究发现，子痫前期胎盘凋亡分子的异常表达与内皮损伤密切相关[16]。本组研究发现，子痫组Caspase-9、Caspase -3、Fas的mRNA浓度显著高于正常胎盘组织(均P<o. p="" -b的异常高表达，可能是借助调控凋亡因子表达进而影响子痫前期的发展。子痫前期的内皮损伤还与炎症因子及氧化应激产物的过表达密切相关。表达于血管内皮细胞表面的VCAM-1可介导炎症细胞迁移;而作为一种炎症调控关键因子，TNF-a则可介导并形成炎症反应瀑布效应[17];而SCD40L则可刺激内皮细胞产生炎症因子IL-8、IL-6、11- 3等，并终导致内皮损伤。OX-LDL、LOX-1、ADM、PTX3等分子具有内皮损伤效应。本组研究证实，子痫组Nogo -B的mRNA不仅与11-1[3、IL-8、IL-6、TNF-a、VCAM-1、CD40的浓度呈正相关关系，且与OX - LDL、LOX -1、ADM、PTX3的浓度也呈正相关关系。

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