乐山地区地中海贫血基因携带情况的调查

　　乐山地区地中海贫血基因携带情况的调查

　　胡军，王红梅，严洁，高建强 乐山市妇幼保健院遗传实验室，四川乐山614000

　　摘要：目的调查乐山地区人群中d和p地中海贫血(简称地贫)的发生率、基因缺陷类型及频率，为该地区进一步开展地贫基因产前诊断，有效预防重型地贫患儿出生及优生优育事业的发展奠定基础。方法 随机抽取2岁以卜乐山地区常住人口3 500例进行地贫筛查;对筛查阳性的受检者采集其血样进行地贫基因检测，对基因型频率分布进行调查。结果往3 500份外周血标本中，地贫筛查阳性者341例，初筛阳性检出率为9. 74%。经基因分析和鉴别诊断，确诊地贫基冈携带者201例，地贫基因携带率为5. 74%。检出仅地贫109例，人群仅地贫发生率为3. 11%，发现12种基因型;检出突变型B地贫98例，人群B地贫发生率为2. 80%，发现13种基因型，其中6例为p地贫合并d地贫，占p地贫比例为6. 12c70。结论①乐I JI地区人群中仅和p地贫的基因携带率均较高;②在贫血患者中应考虑地贫的叮能;③在婚检、备孕及已孕夫妇中应进行地贫的筛查和诊断，必要时对胎儿进行产前诊断。

　　关键词：地中海贫血;地贫基因携带率;基因型频率

　　中国图书分类号：R556.6文献标识码：A文章编号：1001-4411( 2018) 11- 2529 -03;doi:10.7620/zgrybj.j.issn.1001-4411. 2018.11 43

　　地中海贫血亦称海洋性贫血(简称地贫)，是由于珠蛋白基因的遗传性缺陷使珠蛋白链合成障碍(一种或几种珠蛋白数量不足或完全缺乏)，导致人体不能合成正常的血红蛋白，红细胞易被溶解破坏从而导致贫血的一组先天性溶血性疾病。仪和B地贫是危害性大的人类遗传病之一，并存在明显的地域差异[1-2]。在本研究之前没有相关的数据报道，但时有地贫的患者出现。本次调查以乐山地区常住人口为对象，采用随机抽样的方式进行调查，采用血常规筛查，基因诊断的方法进行地贫确诊[3-6]，初步了解乐山地区当地人群仪和B地贫的基因缺失或突变类型以及分布频率等资料，为该地区进一步开展地贫基因产前诊断，有效预防重型地贫患儿出生及优生优育事业的发展奠定基础。

　　1材料与方法

　　1.1 调查对象随机抽采2015 -2016年来乐山市妇幼保健院体检及孕检的2岁以上人群的血常规分析结果3 500份，其中男性l 694例，女性1 806例，均为乐山地区户籍常住人口。本研究经医院伦理委员会批准，患者及家属知情同意。

　　1.2 方法

　　1.2.1 标本采集 采用EDTA - K2真空抗凝管(含EDTA-K2)采集2 ml外周静脉血混匀，待检。对于地贫筛查阳性的被检测者重新招回采集血液标本，4℃冰箱暂存，1周内进行检测。

　　1.2.2地贫筛查 将采集的血液标本即刻进行血常规测定，检测仪器为迈瑞5380全自动血细胞分析仪，采用原厂配套试剂检测。对于红细胞平均体积( MCV)<80 n和(或)红细胞平均血红蛋白量(MCH) <27 pg即判断为地贫筛查阳性。

　　1.2.3 地贫基因检测2~8℃冷链运输到四川大学华西第二院检测。

　　1.2.3.1 DNA提取试剂：凯杰生物工程有限公司全血DNA提取试剂盒。操作：按说明书进行快速提取DNA，检测前置-20℃保存备用。

　　1.2.3.2地贫基因检测试剂：亚能生物技术有限公司地贫基因检测试剂;方法：仅地贫的基因检测采取gap-PCR检测SEA、-a3.7、- a4.2，PCR反向斑点杂交法检测0【一珠蛋白基因QS、CS、WS;p地贫的基因检测采取PCR反向斑点杂交法检测B-珠蛋白基因：CDs41/42、IVS2 - 654、- 28、CDs71/72、因型的4. 59%。仅地贫合并B地贫基因携带者6例，占ol地贫基因携带者的比例为5. 500/0，人群发生率为0. 17 010。

　　2.2 乐山地区B地贫的基因缺失、突变类型及其频率见表2。

　　表2乐山地区B地贫的基因缺失、突变类型及其频率

　　CD17.3E. CD31、CDs27/28. CD43. -32. -29、- 诊断结果 基因型 例数

　　30、CDs14/15、CAP、Int、IVSI-1、IVSI-5共17种点突变。

　　2结果

　　在3 500份外周血筛查中，血常规筛查阳性者341例，筛阳性检出率为9. 74 010。经地贫基因检测，仅或(和)B珠蛋白基因存在缺失或突变者共201例，占筛查阳性的比率为58.94u/o (201/341)，地贫基因携带率为5. 74% (201/3 500)。

　　2.1 乐山地区仅地贫的基因缺失、突变类型及其频率见表1。

　　表1乐山地区d地贫的基因缺失、突变类型及其频率

　　诊断结果 基因型 例数基雩裂孥率耋星瑟

　　共检出d地贫基因携带者109例，人群发生率为3. 11%，基因型有12种。其中频率高的是2种常见的缺失型～SEA/仪d、一仅3 7/仪d，占仅地贫全部基因型的87.16%。仅地贫突变型5例，占a地贫全部基基因型基因型构频率(%)成比(%)

　　共检出B地贫基因携带者98例，人群发生率为2. 800/0，基因型有13种，突变型数9个。其中频率高的是3种常见的突变类型(CD17位点杂合突变、IVS2 -654位点杂合突变、CDs41/42位点杂合突变)共85例，占B地贫全部基因型的86. 73%。B地贫合并a地贫基因携带者6例，占B地贫基因携带者的比例为6. 12 010，人群发生率为0.17u/o。

　　3讨论

　　乐山市位于四川省的南部，人口3 235 756人。在乐山市各区县均有地贫患者的报道，本次研究乐山地区地贫基因人群携带率为5. 74%，亦为高发地区，这也印证了各区县均有地贫患者出现的原因。

　　通过本次调查仅地贫基因携带率为3. 11%，明显高于之前报道的四川省水平1. 660/0‘8].低于全国的高发省份广东(8.53%)一1，广西壮族自治区( 15. 20'/0) [10]。调查发现的基因型有12种，其中频率高的是2种常见的缺失型一一SF.A/d仅、一d 3。7/仅仅，分别占仅地贫全部基因型的55. 04%、32. 11%。而突变型(a" a/aa、仪ws 0【/仪仪)两项共占d地贫全部基因型的4. 59%，这也印证了之前文献报道可能存在突变型的推测，并且比例较高，提醒仪地贫检测时一定要做仪地贫基因突变型检测，否则会造成较大比例的漏诊。根据仅地贫的遗传规律及上述调查数据可以得出在乐山地区出生HbH病、Hb Bart-s病患儿的概率较高，所以在乐山地区应对孕前、孕期夫妇进行地贫的筛查、诊断，且必要时对胎儿进行地贫产前诊断。

　　通过本次调查人群中B地贫基因携带率为2. 800'/0，略低于之前文献报道的四川省水平3. 20%，高于四川省江油地区的2.40'/0‘111，略高于我国的高发省份广东省(2. 78u/o)明，低于广西壮族自治区(8. 160'/0)[12。”1，调查发现的基因型有13种，B地贫基因突变类型数9个[-28 (A>G)、-29 (A>G)、CD17 (A>T)、CD43 (G>T)、CDs 27/28(+C)、CDs 41/42(- TTCT)、CDs 71/72 (+A)、IVS2-654 (C>T)、CAP(A>C)]。其中频率高的是3种常见的突变类型(CD17位点杂合突变、IVS2 -654位点杂合突变、CDs41/42位点杂合突变)发生率高，占B地贫全部基因型的86. 73%，突变高发类型与四川省之前报道相同。通过上述分析乐山地区B地贫发生率较高、突变热点(CD17位点突变导致Bo、IVS2-654位点突变导致p+、CDs41/42位点突变导致p [14])导致珠蛋白p链减少严重，根据遗传规律出现重型p地贫、中间型p地贫(30/[30、30/[3+、p+/p+)概率较大[15]。

　　在本次调查中还发现有6例B地贫复合仅地贫基因携带者，占B地贫基因携带者的比例为6. 12%，人群发生率为0. 17%。这也间接反映出乐山地区仅地贫、B地贫基因携带率较高。在地贫检测时两类地贫宜同时检测，避免出现漏诊。

　　综上所述，在乐山地区仅地贫和3地贫基因携带均较高，应在婚前及孕前做好地贫筛查与诊断，对胎儿必要时应进行产前诊断。在出现贫血的患者中应考虑是否为地贫，不可盲目补铁。志谢感谢四川省产前诊断中心(四川大学华西第二医院)为本次调查送检样品所做的基因检测工作。感谢乐山市妇幼保健院许文惠、李立、祝晓容、余小雄、罗莎、谈健民、曹敏、胡桂琼、戴利等各位老师对于本次调查所做的大量工作

　　参考文献

　　[1]Zeng yr, Huang SZ. Disorders of haemoglobin in China [Jl.JMed Genet, 1987, 24 (10): 578-583.

　　[2]Cao A, Galanello R, Rosatelli MC. Prenatal diagnosis and screening of the haemoglobinopathies[J] Baillieres Clin Haematol, 1998,1 1(1)：215-238.

　　[3]蔡稔，梁听，潘丽珍，等，血液学指标在育龄人群地贫筛查中的诊断价值[J].中国优生与遗传杂志，2003，11(1)：129 -132.

　　[4]张之南.血液病诊断及疗效标准[M'].第2版，北京：科学出版社，1998: 49-58.

　　[5]张俊武，龙桂芳.血红蛋白与血红蛋白病[M].南宁：广西科学技术出版社，2003: 204-230.

　　[6]徐湘民.地中海贫血预防控制操作指南[M]北京：人民军医出版社，2011：16 -25

　　[7]郭生金，四川省2010年人口普查资料[M].北京：中国统计出版社，2012:2.

　　[8]江虹，贾劲，周静，等，四川地区人群地中海贫血的筛查及基因分析[J].生物医学工程学杂志，2011，28 (1)：135-137.

　　[9]Xu XM, Zhou YQ, Luo GX, et al.The prevalence and spectrum of alpha and beta thalassaemia in Guangdong Province: implications for the future health burden and population screening [J]. J Clin Pathol, 2004, 57(5):517-522.

　　[10]张伯红，王黎明，王申五，等，广西壮族自治区cfri液Hb Bart's的筛查及a-珠蛋白基因分析[J].中国医学科学院学报，1996，18 (8): 165.

　　[11]兰玉梅，四川江油地区孕产妇B-地中海贫血基冈结果分析[J].西南军医，2015，17 (6)：621-623.

　　[12]Liang R, Liang S,Jiang NH, et al.a-and3-thalassemia among Chinese children in Guangxi province, P.R.China molecular and hematological characterization[J]. Br J Haematol, 1994, 86(2)：351-354.

　　[13]刘富华，贾艺聪，陈洁晶.广西地区13 589例地中海血筛查结果及基因突变类型分析[J].临床血液学杂志，2015，28(6)：966-969.

　　[14]贺林.常见出生缺陷产前诊断的行业规范与指南[M].第1版，北京：人民卫生出版社，2013：115-117.

　　[15]邬玲仟，张学.医学遗传学[M].第1版，北京：人民卫生出版社，2016：262 -268.