血Th9、IL-9和IFN-^y水平变化及意义

　   血Th9、IL-9和IFN-^y水平变化及意义

　　沈进，沈国强，王晓明，孙少君，杨茜云(无锡市第九人民医院，江苏无锡214000)

　　[摘要]目的：探讨Th9、IL-9和IFN-'y在肺炎支原体肺炎(MPP)患儿发病中的作用及其与肺功能变化的相关性。方法：选择100例MPP患儿，其中喘息组42例，非喘息组58例;另选体检健康的儿童25例为对照组。采用流式细胞术检测外周血Th9细胞比例，采用ELISA测定IL-9和IFN-，y水平;采用肺功能仪检测肺功能，检测指标为第1秒用力呼气客积占预计值的百分比(F'EVI% -pred)、第1秒用力呼气容积占用力肺活量的百分比(FEVl/FVC%)及残气量占预计值的百分比(RV% -pred)。采用Pearson相关分析检验结果的相关性。结果：喘息组患儿的FEVl% -pred和FEVl/FVC%低于非喘息组患儿，RVo/o -pred、Th9、IL-9、IFN-./水平均高于非喘息组患儿(P均<0. 05)。MPP患儿的Th9细胞比例(r分别为-0. 962 4、-0. 961 1)、IL-9水平(r分别为-0. 951 0、-0. 958 0)、IFN-^y水平(r分别为-0. 960 9、-0. 962 9)与FEVl% -pred和FEVl/FVC%均呈负相关，与RV% -pred呈正相关(r分别为0. 978 9、0.982 5、0.963 5)。结论：MPP患儿外周血Th9、IL-9和IFN-7水平明显升高，且升高程度随着患儿出现喘息而加大，这种变化可为临床判断患儿肺功能降低提供参考。

　　[关键词]肺炎支原体;肺炎;Th9细胞;白细胞介素-9;IFN;肺功能

　　[中图分类号] R725.6 [文献标识码lA [文章编号]1672-108×( 2018) 06-0004-03

　　Changes and Significance of Th9, IL-9 and IFN-y Levels in Peripheral Blood of Children with Mycoplasma Pneumoniae Pneumonia Shen Jin, Shen Guoqiang, Wang Xiaoming, Sun Shaojun, Yang Qianyun ( The Ninth People's Hospital of Wuxi City Jiangsu. Wuxi 214000, China)

　　[Abstract] Objective: To investigate the role of Th9, IL-9 and IFNl levels in children with Mycoplasma Pnerunoniae pneuruonia (MPP) and its correlation with pulmonary function. Methods: A total of 100 children with MPP were divided into asthma group ( n=42) and non-asthma group (n=58) ; and another 25 healthy children were extracted as control group. The percentage of Th9 cells in peripheral blood were detected by flow cytometry and IL-9 and IFN-7 levels were measured by ELISA. Pulmonary function was determined by spirometer, with the testing indicators of FEVl%-pred, FEVl/FVCqo and RV%-pred. Correlation of the results of pulmonary function indicators were analyzed by Pearson analysis. Results: The FEVl%-pred and FEVl/FVC% in asthma group were lower than those in non-asthma group, and the RVo/o -pred, Th9, ILP9 and IFN-y levels were higher than those in non-asthma group(P<0. 05). The ratio of Th9 cells ( r were respectively -0. 962,4 and -0. 961,1) , IL-9 levels ( r were respectively -0. 951,0 and -0. 958 ,0) , IFN--/ levels ( r were respectively -0. 960 ,9 and -0. 962 ,9) showed significant negative correlation with FEVl % -pred and FEVl/FVC% and had positive correlation with RV% -pred ( r were respectively 0. 978,9, 0. 982,5 and 0. 963,5 ) in children with MPP. Conclusion: The Th9, IL-9 and IFN-./ levels in peripheral blood of children with MPP increased significantly, and the degree is aggravating with the pulmonary wheezing, which can provide reference for clinical judgment of pulmonary function decline in children.

　　[ Keywords] Mycoplasma pneumoniae; pneumonia; Th9 cells; IL-9; IFN-lt; pulmonary function

　　肺炎支原体肺炎(Mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP)是由肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae，MP)感染引起的间质性肺炎及毛细支气管炎样改变，临床表现为顽固性剧烈咳嗽。11。MPP的发病机制不仅与MP侵害有关，还与免疫功能紊乱有关口。31。辅助性T细胞(Th细胞)中，Thl分泌1干扰素(IFN一^y)、白介素(11)一2等细胞因子，参与细胞免疫反应，清除体内病原微生物;Th2分泌IL-9等细胞因子，在体液免疫中发挥重要作用;Th9是近发现的一种新型CD4+效应T细胞，通过特异性分泌IL-9作用于炎性细胞和组织细胞M1。MPP患儿常存在Thl/Th2失衡。本研究旨在探讨Th9、IL-9和IFN一1在MPP患儿发病中的作用及其与肺功能变化的相关性。

　　1 资料和方法

　　1.1一般资料

　　选择2013年9月至2016年11月我院儿科收治的MPP患儿100例，其中男48例，女52例，年龄(7.5±3.9)岁。纳入标准：(1)临床诊断符合第7版《实用儿科学》中MPP的诊断标准口1;(2)实验室检测MP阳性;(3)首次接受治疗，之前未使用激素及免疫调节剂等影响免疫功能的药物;(4)家属同意并签署知情同意书。排除标准：(1)伴有其他呼吸系统疾病;(2)伴有过敏性及免疫相关性疾病。根据有无喘息症状(气急、哮呜音等)分为喘息组42例，其中男26例，女16例，年龄(7.1±2.8)岁;非喘息组58例，其中男34例，女24例，年龄(7.7±3.6)岁。另选同期我院门诊体检健康的儿童25例作为对照组，其中男16例，女9例，年龄(7.8±2.9)岁。三组儿童性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

　　1.2 方法

　　三组儿童于人院当日或次日清晨空腹抽取外周静脉血6 mL，分置于抗凝管和非抗凝管中。非抗凝管血样经3 000 r/min离心10 min后分离血清，采用ELISA[严格按照试剂盒(R&D Systems公司)说明书]检测IL-9、IFN一叫水平。抗凝管血样采用淋巴细胞分离液分离单个核细胞( PBMC)，用PBS充分洗涤，再用含10 010胎牛血清的RPMI-1640调整细胞密度为3xl06/mL，分别加入鼠抗人CD3、CD28 mAb(美国BD-PharMingen公司，终浓度分别为0.2 mg/L、1.0 mg/L)，置于5U/o CO：培养箱中孵育6h，然后收集PBMC用PBS洗涤3次。将收集好的PBMC进行荧光标记抗体表面染色，每管加入100 VL细胞悬液(细胞lxl06个)，然后加入CD4-PC5荧光mAb5肛L，4℃避光孵育30 min，洗涤，除去上清液，细胞固定、破膜、胞内染色。测定管中加入抗人IL-9-PE 5yL，同型对照管中加入同型对照抗体5 VL，混匀后于4℃避光反应30 min。反应结束后，用3 mL PBS洗涤2次，除去上清液，每管加入1010多聚甲醛固定液0.5 mL固定后采用流式细胞仪检测。首先设门于淋巴细胞，再以CD3+T细胞设门，进一步检测CD3+CD4+IL-9+细胞(主要表达于Th9细胞)，计算Th9细胞比例。采用肺功能仪检测三组儿童的肺功能，检测指标为第1秒用力呼气容积占预计值的百分比(FEVl% -pred)、第1秒用力呼气容积占用力肺活量的百分比( FEVl/FVC%)及残气量占预计值的百分比(RV% -pred)。

　　1.3 统计学方法

　　应用SPSS18.0软件，计量资料以均数±标准差表示，两两比较采用≠检验，三组比较采用F检验，相关性分析采用Pearson相关分析，P<o. p="" 05为差异有统计学意义。

　　2结果

　　2.1 三组儿童外周血Th9、IL-9、IFN-一y水平及肺功能比较 三组儿童外周血Th9、IL-9、IFN一^y水平及RVo/o -pred比较，喘息组>非喘息组>对照组(P均<0. 05);FEVl% -pred、FEVl/FVC%比较，喘息组<非喘息组<对照组(P均<0. 05)。见表1。

　　2.2 MPP患儿外周血Th9、IL-9、IFN.1水平与肺功能指标的相关性

　　MPP患儿外周血Th9、IL-9、IFN-7水平与FEVl% -pred、FEVl/FVC%呈负相关，与RV% -pred呈正相关。见表2。

　　表1 三组儿童外周血Th9、IL-9、IFN-y水平及肺功能比较

　　注：a与对照组比较，P<o. p="" 05。<="" 05.b与非喘息组比较，p

　　表2 MPP儿童外周血Th9、IL-9、IFN-y水平与肺功能指标的相关性

　　3讨论

　　在于呼吸道纤毛上皮之间，不侵入肺实质，通过细胞膜上的神经氨酸受体位点，吸附于宿主呼吸道上皮细胞表。

　　MP是常见的呼吸道病原体，主要通过飞沫传播，存 面，抑制纤毛活动并破坏上皮细胞。MP感染不但可引起肺部损伤，还可造成肺外多器官的损害。关于MPP的发病机制目前研究主要倾向于MP的直接侵入、呼吸道上皮细胞吸附和免疫调节机制异常，其中免疫调节机制异常近年来备受关注。研究表明，体液免疫和细胞免疫共同参与MPP的发病过程，体液免疫和细胞免疫的平衡紊乱，主要表现为T淋巴细胞免疫功能的低下和B淋巴细胞异常活化，同时激活机体内的补体系统。王鑫等p1指出，MPP患儿存在免疫功能失调，表现为Thl/Th2下降，Th2占优势。MPP患者体内，常存在Thl/Th2失衡‘10 3。本研究以IFN一^y代表Thl功能，IL-9代表Th2功能，结果显示喘息组和非喘息组患儿的IL-9和IFN-./水平均明显高于对照组，表明Thl、Th2均参与了MPP患儿呼吸系统的免疫损伤，与其他研究结果p 3相符。

　　Th9是一种新型效应CD4+T细胞亚群，可促进炎症细胞数量上升并分泌相关炎症介质，促进炎症的发生发展H1。IL-9是Th9细胞的效应因子，主要通过肥大细胞发挥生物学效应，介导JAK/STAT信号通路，在哮喘、实验性变态反应性脑脊髓炎、肿瘤等多种自身免疫性疾病和免疫耐受、蠕虫免疫的发生发展过程中具有重要作用[11]。国内研究提示，Th9及IL-9的异常高表达可能参与了儿童MP感染的发病。本研究结果显示，MPP患儿的Th9和IL-9水平均高于对照组，且喘息组患儿均高于非喘息组患儿，表明Th9及IL-9在MPP患儿中的表达升高，且随着患儿出现喘息升高程度更加明显，与其他研究结果¨纠相符。

　　MP感染也会影响患儿的肺功能。FEV1 010 -pred、FEVl/FVCo/o和RVo/o -pred是反映肺部功能的常用检测指标。本研究结果显示，MPP患儿的FEVlo'/o -pred、FEVl/FVC%均明显低于健康儿童，RV% -pred高于健康儿童，且随着肺部出现喘息症状，患儿的肺功能进一步减退。提示MPP患儿存在气道黏膜受损和气流受限，尤其伴喘息的患儿受限明显，可能是发展为哮喘的高危儿童。气道黏膜受损是气道高反应性的主要因素，而气流受限是气道黏膜受损的一个表现。MP感染诱发哮喘发作不仅与气道黏膜损伤有关，还与细胞免疫失衡有关。本研究结果显示，MPP患儿外周血Th9、IL-9、IFN-^y水平与FEV1 010 -pred、FEVl/FVCo/o均呈负相关，与RVo'/o pred呈正相关，说明Th9、IL-9、IFN一吖在MPP发生发展中具有重要作用。

　　综上所述，MPP患儿外周血Th9、IL-9和IFN一1水平明显升高，且程度随着患儿出现喘息而加大，这种变化可为临床判断患儿肺功能降低提供参考。

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