医学实验方法总结(4):组织水平部分

2018.11.08 13:47
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  上一篇主要是为大家介绍实验方法之一的细胞生物学部分,这一篇给大家来讲组织水平部分。

  一、细胞生物学部分总括

细胞生物学部分总括.png

  二、免疫组化

  (一) SP法

  单克隆抗体MMP-2、MMP-9,SP试剂盒购自ZYMED公司(1 100)。3%H2O2封闭内源性过氧化物酶,微波加热抗原修复, 10%正常羊血清孵育,滴加一抗, 4℃冰箱中过夜, PBS缓冲液(Na2HPO4 8.1 mmol/L,KH2PO41.5 mmol/L,NaCl 137mmol/L, 2.7 mmol/L pH 7.4)振荡清洗后分别滴加二、三抗,DAB显色,苏木素复染,常规封片。

  (二)双层夹心ELISA法

  以纯化后的多克隆抗体作为捕获抗体,以本实验室已经制备的抗LM Internalin A 单克隆抗体3R6为检测抗体,建立双抗夹心ELISA 方法。具体步骤如下:多克隆抗体稀释液 →洗板3次→3% BSA封闭 →洗板3次→待测菌稀释液 →洗板3次→单克隆抗体稀释液 →洗板4次→酶标羊抗鼠IgG →洗板5次→TMB显色液 → 终止液→测定OD450值抗体、抗原和BSA 稀释液均为0.01mol/L、pH7.4PBS。洗板液为含 0.1% Tween-20 的 0.01 mol/L、pH7.4PBS(PBST)。结果判定:以(测定孔 OD 值-空白对照孔OD 值)/(阴性对照孔 OD 值-空白对照孔 OD 值)≥ 2.1(即P/N ≥ 2.1)时判断为阳性。

  以上是医学实验方法组织水平的介绍,只是截取资料的其中一部分,如果需要完整性的资料可通过以下方式获取:

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