PCNA水平在无排卵型功能失调性子宫出血患者中的表达及bFGF抗体、孕酮干预效果研究

　　PCNA水平在无排卵型功能失调性子宫出血患者中的表达及bFGF抗体、孕酮干预效果研究

　　许会英，孙高高，马春霞，严春鲁 兰州市第一人民医院妇产科，甘肃兰州730050

　　摘要：目的研究增殖细胞核抗原( PCNA)水平在无排卵型功能失调型子宫出血患者中的表达以及碱性成纤维细胞，长因子( bFCF)抗体、孕酮对无排卵型功能失调型子宫出血患者的干预效果，旨在为临床诊断以及治疗提供有效的理论依据.，方法选取该院在2014年2月- 2016年7月期间收治的42例无排卵型功能失调性子宫出m患者为观察组，另外选取同期在该院做正常检查的42例健康者为对照组。对两组患者进行刮宫并取子宫内膜细胞，在培养原代子宫内膜细胞的基础E设置孕酮组以及bFGF组，孕酮组分别加入l03 moI/L、l06 moI/L、l09 rriol/I.浓度的孕酮20 M，培养细胞至24 h、48 h、72 h;bF'CF组分别加入浓度为50 ng/L、100 n~L、150 ng/L的bFGF抗体20斗l，培养时间同孕酮组，观察并比较PCNA表达水平。结果对照纽子宫内膜间质细胞PCNA水平明显低于观察组(P<0.05);不同时间bFGF处理，观察组患者Oh、24 h时子宫内膜细胞l，CJ\IA水平变化明显高于对照组(P<0.05)，但随着处理时间的延长，两组患者在48 h、72 h时子宫内膜PCNA水平变化情况比较差异兀统计学意义(P>0.05);予以不同浓度bF、GF处理后子宫内膜细胞PCNA水平明显下降，并且随着浓度的加深逐渐下降(P<0. 05)，但在浓度100 ng/I。、150 ng/l.时，两组患者比较差异无统计学意义(P>0.05);随着孕酮处理时间延长两组子宫内膜问质细胞PCNA表达水平均逐渐下降，差异具有统计学意义(均P

　　关键词：增殖细胞核抗原;碱性成纤维细胞生长因子;无排卵型功能失调性子官出血;孕酮

　　中国图书分类号：R711. 52文献标识码：A文章编号：10014411(2018)15-3381-04;doi:10. 7620/zgfyhj.j.issn.1 001-4411. 2018.15.06

　　Key words: Proliferating cell nuclear antigen; Basic fibroblast growth factor; Anovulatory dysfunctional uterine bleeding; Progesterone

　　无排卵型功能失调性子宫出血在临床上简称(2013-3-52)血，主要以月经时间延长或是月经量增多为临床特点，且月经变频。目前临床上通常采用排除性的方式诊断无排卵型功能失调性子宫出血，临床诊断较为复杂。随着免疫学生物标记检测法的发展，相关报道指出在无排卵型功能失调性子宫出血患者中，PCNA表达水平显著高于正常女性子宫内膜细胞中的表达水平L2。为临床诊断提供了相应的理论依据。而近些年随着生活方式的改善以及多样化，导致临床上并发无排卵型功能失调性子宫出血的发病率有逐渐上升的趋势，因此寻找有效安全的治疗方式是目前研究的热点旧。相关文献表示，性激素受体、血管活动物质或是生长因子对子宫局部微环境的改变具有一定的影响，这与无排卵型功能失调性子宫出血疾病的进展具有一定的相关性H。而子宫内膜的修复主要靠血管再生的功能，但是血管的再生功能受到多种激素以及生长因子的影响，而在各种激素以及生长因子中以孕酮和碱性成纤维细胞生长因子( bFGF)为重要‘7_。本文旨在研究PCNA水平在无排卵型功能失调性子官出血患者中的表达及bFGF抗体、孕酮干预效果，为治疗无排卵型功能失调性子官出血提供临床依据，具体报道如下。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料选取2014年2月-2017年7月本院收治的42例无排卵型功能失调性子宫出血患者为研究对象。纳入标准：①患者经手术以及病理学检查，确诊为无排卵型功能失调性子宫出血患者;②手术前经过B超以及相关检查排除相关生殖器官器质性病变;③所有患者均知情并同意参与此项研究;④本研究经医院医学伦理委员会批准。排除标准：①患者同时伴有心、肺、肾、血液系统等疾病，或是合并严重的感染未控制好的患者;②手术前服用了激素类药物。观察组年龄41~55岁，平均年龄(45. 64±8. 26)岁。另选42例健康女性体检者作为对照组，年龄39～53岁，平均年龄(44. 31+7. 84)岁，两组患者年龄、性别等一般资料比较差异无统计学意义(P>0. 05)。

　　1.2 子宫内膜细胞的分离、纯化以及培养 所有研究对象行刮宫术，将刮取的子宫内膜组织放在装有含抗生素D - Hanks液的无菌小瓶内，然后低温保存。检测前用含抗生素D - Hanks液进行反复冲洗，去除刮取物中的血块与杂质，然后将得到的子宫内膜组织剪碎，面积大约为1 ITlII13，然后在常温下使用0. 25%胰酶消化10~15 min后制成细胞悬液。制成细胞悬液之后运用80目筛去除黏液和未消化的组织，再使用300目筛将得到的滤液1 000 r/min心15 min后去除上清，PBS吹打细胞沉淀制成悬液，再次离心15 min取上层血清。采用含有10%胎牛血清的DMEM/F-12制成细胞悬液并调整浓度为5xl05/ml接种于培养瓶中，于常温中饱和湿度、50/0 CO。的恒温培养箱中培养，次日换液。培养瓶中的细胞贴壁后即可传代，传代3次后使其性状保持稳定。

　　1.3 PCNA表达水平比较 采用酶联免疫吸附法检测两组被检者PCNA表达水平，试剂盒由上海酶联生物有限公司提供。

　　1.4 bFGF抗体子宫内膜细胞后在不同时间内PCNA的表达情况分别用bFGF抗体处理两组被检者子宫内膜细胞。每孔加入bFGF单克隆抗体20¨l，调至其终浓度为100 n/L，37℃饱和湿度、5% COi的恒温培养箱中继续培养24 h、48 h和72 h后分别进行细胞的收集，每组重复3个，离心后收集细胞上清于-20℃环境中备用。

　　1.5 子宫内膜细胞经不同浓度bFGF抗体处理后PC-NA的表达情况 对两组患者使用bFGF因子处理子宫内膜细胞。然后加入bFGF单克隆抗体20斗1，将浓度调至50 ng/L、100 ng/L、150 ng/L，调制后处置方式同上。

　　1.6 孕酮处理子宫内膜细胞后在不同时间内PCNA表达情况采用孕酮处理两组子宫内膜细胞。然后加入孕酮20，调至其终浓度为l06 mol/L，制成后处置方式同上。

　　1.7 使用不用浓度孕酮处理子宫内膜细胞后PCNA的表达情况对两组患者使用孕酮处理。然后每孔加入孕酮20，调至其终浓度分别为103、106、109 mol/L，调制后处置方式同上。

　　1.8统计学分析采用SPSS 18.0软件进行统计学分析，计量资料采用均数±标准差(x+s)表示，使用f检验与方差分析，计数资料采用率(%)描述，采用卡方检验，并以P

　　2结果

　　2.1 两组患者子宫内膜间质细胞PCNA表达水平比较对照组子宫内膜间质细胞PCNA水平明显低于观察组(P<0.05)，见表1。

　　表1两组患者子宫内膜间质细胞PCNA表达水平比较(i±s)

　　2.2 子宫内膜细胞经不同时间bFGF抗体处理后PC-NA水平表达情况在不同时间bFGF处理中，观察组患者在Oh、24 h时子宫内膜细胞PCNA水平变化明显高于对照组(P<0.05)，但随着处理时间的延长，两组患者在48 h、72 h时子宫内膜PCNA水平变化情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

　　2.3子宫内膜细胞经过不同浓度的bFGF抗体处理后PCNA表达水平 子宫内膜细胞经不同浓度bFGF处理后PCNA水平明显下降，并且随着浓度的加深逐渐下降(P<0.05)，但使用浓度在100 ng/L、150 ng/L时，两组患者比较差异无统计学意义(P>0. 05)，见表3。

　　表2子宫内膜细胞经不同时间bFGF抗体处理后PCNA表达水平(i±s)

　　表3子宫内膜细胞经过不同浓度的bFGF抗体处理后PCNA表达水平(i±s)

　　2.4 子宫内膜细胞经孕酮在不同时间处理后PCNA水平表达两组随着孕酮处理时间延长子宫内膜间质细胞PCNA表达水平逐渐下降，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表4。

　　表4子宫内膜细胞经孕酮在不同时间处理后PCNA水平表达(i±s)

　　2.5 子宫内膜细胞经不同浓度孕酮处理后PCNA表达水平 随着孕酮浓度加深，两组子宫内膜间质细胞PCNA表达水平显著下降，但观察组患者PCNA表达水平仍高于对照组(P<0.05)，见表5。

　　表5子宫内膜细胞经不同浓度孕酮处理后PCNA表达水平(i±s)

　　3讨论

　　无排卵型功能失调性子官出血是指月经功能调节出现异常而引起的不正常性子宫出血，在中医学上属于“崩漏”范畴9-10。临床研究表明导致其发病的主要机制是子宫内膜发生局部改变，除此之外，体内激素水平的异常变化也是导致此病发病的关键。而且随着社会的发展，人们生活方式的多样化，无排卵型功能失调性子宫出血的发病率有逐渐升高的趋势，引发人们对子宫内膜局部病变的重视。

　　临床上对此病的诊断方式多通过排除方式进行确诊，但是这种检测方式极其缓慢，不利于疾病的及时治疗，严重者还会加重患者的病情12，因此寻找有效的检测是目前临床上关注的重点。PCNA初是在系统性红斑狼疮患者中发现，其主要存在于增殖细胞与肿瘤细胞中，后来随着医疗技术的发展，研究发现其余细胞DNA有着密切的关系，在细胞增殖启动过程中起着重要作用[13]。且临床上也有诸多文献表明其在各种肿瘤细胞中的表达水平明显提高14。本研究结果显示，子宫内膜间质细胞PCNA水平在无排卵性功能失调性子宫出血患者中PCNA的表达水平显著提高，考虑其可为此病的诊断提供相应的诊断依据。

　　相关文献表明，无排卵型功能失调性子官内膜出血的发展与生长因子、血管活性物质、性激素等子宫局部微环境的改变有着密切关系。月经的根本是血管再生，并且血管再生在子宫内膜的自我修复中有着重要的位置，而血管再生功能与生长因子有着密切的相关性。在生长因子中为重要的是bFGF与bFGF受体。bFGF是一种能够促进纤维细胞生长的物质，其在血管形成、促进组织再生和神经组织生长发育、促进创伤愈合与组织修复中起着重要的作。刘小飞等16]学者研究表明，使用bFGF治疗对患者皮肤软组织撕裂脱伤具有显著的临床疗效，能相应的缓解患者的临床症状。本研究结果显示，bFGF抗体对无排卵型功能失调性子官出血患者具有较好的临床疗效，能促进子宫内膜细胞的修复，与上述学者研究结果相似。

　　在临床上除了使用bFGF抗体治疗修复子宫内膜细胞之外，性激素治疗也是临床上常用于止血与促排卵的药物。其可促进子宫内膜脱落彻底，然后从药物性刮宫方面发挥作用，从而达到止血的目的17一引。孕酮在体内对雌激素激发过的子宫内膜中有着显著的形态学作用，是妊娠期妇女所必需的一种性激素。潘春燕等[9]学者研究表明，孕酮能有效地降低子宫内膜厚度，同时降低相关激素的表达水平。还有相关研究表明左炔诺孕酮能减少患者的月经量，并且对肝功能与血脂没有明显不良反应20-21。本研究结果证实了上述结论。

　　综上所述，无排卵型功能失调性子官出血患者中PCNA的表达水平明显上升，而孕酮与bFGF抗体对PCNA表达水平起到显著的下降作用，进一步证明了这两种药物的运用能促进血管的生成，可为治疗无排卵型功能失调性子宫内膜患者提供理论依据。

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