丙种球蛋白无反应型川崎病患儿淋巴细胞亚群、肿瘤坏死因子一仪检测的意义

　　丙种球蛋白无反应型川崎病患儿淋巴细胞亚群、肿瘤坏死因子一仪检测的意义

　　陈雪贞 周小琳 叶佳云 梁欢欣廖雄宇 钟奕 覃丽君

　　摘要目的：检测丙种球蛋白无反应型川崎病患儿外周血淋巴细胞亚群、肿瘤坏死因子一仅(TNF一仅)的变化，为IVIG无反应型KD患儿的诊断提供依据。方法：80例KD患儿，发病10天内接受IVIG标准治疗，对IVIC无反应组与敏感组患儿间外周血淋巴细胞亚群、TNF-a水平的差异进行比较。结果：外周CD4+/ CD8+、CD3+CD4+、CD3 CD19+、TNF-a水平无反应组明显高于敏感组，差异有统计学意义(P<0.05);CD3+CD8+、CD3+明显低于敏感组，差异有统计学意义(P< 0.05);CD3。(CD16+CD56)+、CD20两组间差异无统计学意义(Jp>0.05)。

　　结论：相对于敏感型患儿，丙种球蛋白无反应型川崎病患儿外周血巴细胞亚群、TNF-a有更明显的异常，为早期诊断丙种球蛋白无反应型川崎病提供重要依据和参考指标，同时有助于预测KD患儿冠状动脉损害的发生几率。

　　关键词:川崎病;丙种球蛋白无反应型;淋巴细胞亚群;肿瘤坏死因子一d

　　DOI: 10.3969/j.issn.1 671-301X.2018.04.010

　　川崎病( Kawasaki Disease，KD)即皮肤黏膜淋巴结综合征，静脉注射大剂量丙种球蛋白( intrave-nouslmmunoglobulin，IVIG)在KD患儿治疗中取得了显著疗效，但部分患儿呈IVIG无反应型。淋巴细胞免疫活化细胞的激活是本病的基本病理改变之一。IVIG无反应型发生机制还不十分清楚，有研究表明淋巴细胞、肿瘤坏死因子一仪参与介导免疫应答，导致血管内皮免疫性损伤、血管基质的代谢紊乱、遗传易感性等，在KD发病机制中发挥着重要的作用。IVIG无反应型作为KD急性期治疗的临床难题，更容易并发冠状动脉损害( CALs)刮。本次研究回顾性分析比较IVIG无反应型与敏感型的KD患儿，在正规IVIG治疗前淋巴细胞亚群、TNF-a水平的不同，分析讨论二者在IVIG无反应型发病机制中的作用，为选择KD患的临床治疗方案提供更多的科学支持。

　　1 临床资料

　　1.1 一般资料2013年1月至2018年1月期间，于我院收治的80例KD患儿，确诊依据2017年美国心脏协会( AHA)发布的关于川崎病诊断指南的相关诊断标准。伦理委员会审批通过后，大剂量IVIG及阿司匹林的治疗措施经过患儿家属知情同意，所有治疗过程签署知情同意书。排除标准：对病程≥10天或≤4天应用IVIG治疗出现IVIG无反应发生增加有争议-s1。IVIG无反应型：首次给予IVIG治疗后48-72 h，仍然持续发热(>38℃)，或者给予IVIG治疗后热退2-7天甚至2周后再次发热，且至少具备1项以上主要表现的KD。按照首次IVIG治疗的情况，把KD患儿分为两组，即敏感组和无反应组。敏感组：男41例，女29例;年龄6个月-7岁，中位年龄2.4岁;无反应组：男7例，女3例;年龄9个月一8岁，中位年龄2.5岁。

　　1.2 1.2方法 在所有人组的KD患儿在用药前，实行外周静脉血淋巴细胞亚群、TNF-a检测。采用Cytomics FC500型流式细胞仪(美国贝克曼库尔特公司)免疫荧光法检测淋巴细胞亚群( CD3+、CD3+CD4+、CD3+ CD8+、CD4+/ CD8+、CD3- CD19+、CD3( CD16+ CD56)+)。采用双抗夹心酶联免疫吸附法检测TNF-a(美国RD公司)。

　　1.3 运用超声心动图评价是否有冠状动脉损害诊断标准：(1)二维彩色超声心动图显示冠状

　　动脉内膜回声增强;(2)冠状动脉扩张：0-3岁>2.5 mm,>3-9岁>3.0 mm,>9-14岁>3.5 mm;

　　(3)小冠状动脉瘤或扩大为内径<4 mm的局部性扩大，5岁以上儿童不超过冠状动脉内径的1.5倍，中等冠状动脉瘤为4 mm<内径<8 mm，巨大冠状动脉瘤为内径≥8 IIlIlll7。。

　　1.4统计学分析采用统计学软件SPSS 21.0，计量资料描述以(x+sD)表示，两组数据均符合正态分布，并且方差齐性。分别对敏感组及无反应组的淋巴细胞亚群、TNF-a进行独立样本的￡检验，P< 0.05时差异有统计学意义。

　　2结果

　　2.1 两组一般资料比较根据首次IVIG治疗情况，KD组患儿分为两组，即无反应组和敏感组。无反应组：男7例，女3例;年龄范围9月一8岁，中位年龄为2.5岁。敏感组：男41例，女29例;年龄范围6月一7岁，中位年龄2.4岁。分别比较两组患儿间年龄、性别，差异无统计学意义(均为P>0.05)。

　　2.2 IVIG无反应组与敏感组外周血淋巴细胞亚群、TNF-a水平的比较见表1。IVIG无反应组外周血CD4+/CD8+、CD3+CD4+、CD3-CD19+、TNF-a水平明显高于敏感组;CD3+CD8+、CD3+明低于敏感组，差异有统计学意义(P<0.05);两组间CD3-( CD16+CD56)+、CD20无显著差异(JP>0.05)。

　　2.3 IVIG无反应组并发症 [80 010(8/10例)]患儿出现冠状动脉损害( CALs)高于敏感组[57 010(40/70例)]，差异有统计学意义(P<0.05)。

　　表1 IVIG无反应组与敏感组外周血淋巴细胞亚群、 TNF-a水平比较(x+sD)

　　注：与无反应组比较，*P<0.05

　　3讨论

　　大剂量IVIG联合阿司匹林治疗KD在临床应用方面已经达成共识，部分患儿对治疗方案不敏感，即IVIG无反应型。早诊断、早治疗，可以有效减少IVIG无反应型KD的并发症。外周血淋巴细胞亚群、TNF-a，能够早期预测丙种球蛋白无反应型川崎病及冠状动脉损害，治疗时应引起相应注意。

　　在机体免疫系统功能中，淋巴细胞群是至关重要的，反映了机体的免疫状态，其亚群数量和功能的异常会引起机体免疫系统的紊乱。淋巴细胞分为T淋巴细胞(参与细胞免疫，CD3+)和B淋巴细胞(参与体液免疫，CD3。CD19+)以及自然杀伤(NK)细胞(杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞)，包括[CD3。(CD16+56+)+]。在机体免疫系统中，T淋巴细胞及其细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+的数量和相对比值的变化发挥着主导作用。CD4+/ CD8+T细胞比值代表为辅助性T细胞(Th)和抑制性T细胞(Ts)的比值。比值升高，Th细胞功能活化，Ts细胞功能减弱，促使细胞免疫高度活化。同时T细胞活化，释放各种淋巴因子，促进B细胞多克隆活化、增

　　殖分化为浆细胞，机体获得更多的免疫球蛋白及抗体。B细胞主导体液免疫，作为活化B细胞，CD3 CD19+分泌多种免疫球蛋白和抗体介导机体免疫应答。本研究结果表明，无反应组KD患儿外周血CD4+/ CD8+、CD3+ CD4+、CD3。CD19+明显高于敏感组，CD3+ CD8+、CD3+明显低于敏感组。KD患儿淋巴细胞免疫异常，T淋巴细胞总数减少，CD3+降低，CD3+ CD8+的明显减少，Ts细胞减少，导致机体免疫系统的过度激活，处于失衡状态，引起细胞免疫的

　　紊乱。KD患儿的Th细胞和Ts比例出现异常，进而发生机体免疫系统紊乱。本研究中CD4+/ CD8+升高，CD3'CD19+明显增高，表明Th细胞间Ts细胞比值增加，B细胞的激活受到影响，抑制降低而活化增加，促使B淋巴细胞产生大量抗体，KD患儿的体液免疫发生紊乱。研究结果与文献报道一致阳1。 本研究结果表明，IVIG无反应组KD患儿的血清TNF-a水平较高。TNF-a高度活化KD患儿免疫系统。本研究中，IVIG无反应组KD患儿发生冠脉损害的几率明显高于敏感组。这是因为高度活化的免疫系统容易导致血管内皮细胞免疫性损伤。分析可能的原因在于TNF-仪是具有广泛生物活性的多肽调节因子，主要作于血管内皮细胞，增加某些黏附分子的表达，诱发释放血小板活化分子，促进炎性细胞黏附、游走、浸润及中性粒细胞脱颗粒、促凝血、抗纤溶反应，造成动脉粥样硬化。

　　综上所述，外周血淋巴细胞亚群、TNF-a可以评估KD患儿的免疫状况，进而为丙种球蛋白无反应型川崎病及冠状动脉损害早期预测提供重要依据。

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