SOX9与雄激素受体在前列腺癌组织中的表达及临床意义

　　SOX9与雄激素受体在前列腺癌组织中的表达及临床意义

　　王 胜，韩兆东，张清桂，李峰，杨盛帮，苗 树，张 瀚，邓 伟，辛林建，韦 羽

　　[摘要] 目的探讨SOX9与雄激素受体(androgen receptor，AR)之I、白J的相关性，SOX9表达水平与前列腺癌各临床病理特征之问的关系。方法选取免疫组织化学方法分析使用的组织芯片，包含前列腺原化癌50例(含转移癌19例)、前列腺癌旁组织30例，附带患者详细的临床信息，通过免疫组织化学方法检测SOX9与AR在前列腺癌和癌旁组织中的表达水平，分析SOX9与AR的相关性，对SOX9蛋白表达水平与前列腺原位癌、前列腺癌旁组织之间的关系进行分析。.结果SOX9往前列腺癌中的表达水平(7. 160±0.228)较前列腺癌旁组织中的表达水平(5.960±0.067)明显升高，差异有统计学意义(P<0. 05)。AR在前列腺癌中的表达水平较前列腺癌旁组织中的表达水平明显升高，差异有统计学意义、SOX9的表达水平与AR相关，并呈正相关性.，结论SOX9的表达水平与AR呈正相关性，SOX9基冈在前列腺癌『I南床l|‘表现为促癌基凶。

　　[关键词]SOX9;雄激素受体;前列腺癌;促癌基因

　　前列腺癌在我国近20年来发病率不断呈上升趋势，成为男性癌症死亡的主要原因之一1。。前列腺癌的治疗与体内的雄激素受体( androgen receptor，AR)有密切的关系。目前临床上对前列腺癌的治疗，主要通过手术去势或者药物去势治疗，但易产生雄激素抵抗，导致前列腺癌复发。因此，寻找新的前列腺癌分子标记物作为前列腺癌的预后判断标记，有望改进前列腺癌原有的诊断和治疗模式。

　　SOX9是SOX基因家族E亚族中的一员，在肿瘤的发生、发展及转移过程中起重要的作用。笔者通过研究SOX9与AR的关系来进一步探索前列腺癌预后的分子生物学机制，正确判断前列腺癌的恶性程度及预后，为前列腺癌的分子靶向治疗提供理论依据。

　　1材料和方法

　　1.1 一般资料选取免疫组化分析使用的组织芯片(西安爱丽娜公司，中国，货号：PR807a)，包含前列腺原位癌50例(含转移癌19例)、前列腺癌旁组织30例，附患者详细的临床信息。所有患者术前均未接受化疗及放疗，患者年龄( 67. 22±11. 52)岁。

　　前列腺原位癌患者中< 60岁4例，≥60岁46例;Gleason评分<7分18例，≥7分32例。

　　1.2试剂 羊抗兔二抗(博士德生物公司，中国，货号：BA1054)，AR抗体(Abcam公司，美国，货号：ab198394)，SOX9抗体(Abcam公司，美国，货号：ab3697)，口一肌动蛋白(p-actin)抗体(Abcam公司，美国，货号：ab8227)。

　　1.3 免疫组织化学方法标本切片保存在10%中性福尔马林中，随即石蜡块包埋，将石蜡包埋组织切成厚度4 ym切片，二甲苯脱蜡后水化使之能进行免疫组织化学(以下简称“免疫组化”)DAB染色，染色使用免疫组化试剂盒(迈新生物技术开发有限公司，中国，货号：1410319706)。随后简短地进行蛋白酶消化和过氧化物酶阻断后，按1：250的比例稀释一抗，将稀释后的一抗孵育切片，4℃过夜。第2天洗净切片，用过氧化物标记的多聚物及色原体基质处理以发现目标蛋白染色，在整个免疫组化处理中，空白对照不加一抗处理，在苏木素复染后，请2名有经验的病理实验工作者各自独立对组织的免疫染色进行评分，这2名工作者对患者的临床病理报告及预后完全不知情。随后对2组评分数据进行比较，任何有差异评分的切片均重新评估，直至2名工作人员的评分一致。评分方法：取10个典型的显微镜下视野并数出阳性染色细胞数，计算出阳性细胞比例。根据抗体说明书，细胞质染色即为阳性(由于目标蛋白染色的异质性，对肿瘤切片评分采取半定量的方式)。根据染色细胞的比例(0~ 100%)及染色的深度(0.阴性、1.弱阳性、2一中等阳性、3.强阳性)来评定每1个肿瘤组织切片目的蛋白表达水平，染色细胞比例评分及染色深度评分相乘构成终的免疫组化评分。1.4数据库泰勒(Taylor&Francis)数据库，是国际上常用的医学公共数据库，是研究前列腺癌mRNA和miRNA表达的重要数据库，本研究共使用150例癌样本和29例癌旁样本。

　　1.5统计学处理应用SPSS 17.0统计软件进行数据分析。计数资料以均数±标准差(i±s)表示，2组比较采用独立样本f检验，计量资料以率表示，2组比较采用卡方检验。以P <0. 05为差异有统计学意义。

　　2结果

　　2.1 SOX9在前列腺中的表达水平 在50例前列腺癌组织和28例前列腺癌旁组织中，SOX9在前列腺癌中的表达水平(7.16 +0.228)较前列腺癌旁组织中的表达水平(5.96 +0.067)明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。

　　2.3 SOX9与AR在前列腺癌中表达水平的相关性在泰勒数据库中的150例前列腺癌组织中，通过相关性分析发现SOX9的表达与AR相关，并呈正相关关系。见图3。

　　图3 SOX9与雄激素受体在前列腺癌中的表达水平的相关性

　　3讨论

　　近年来由于各种因素影响，前列腺癌在中国发病率逐年上升。本研究从分子水平对前列腺癌进行了更深入地研究，目前这是泌尿外科疾病研究的热点问题，了解其发生和扩散机制，实现肿瘤的早期珍断，阐明前列腺癌相关发病调节机制，这对寻找能够遏制前列腺癌发生、发展的药物以及分子靶标有着重大的意义。

　　前列腺癌常用的治疗是雄激素剥夺治疗( an-drogen-deprivation therapy，ADT)，但几乎所有患者在经过14~ 30个月的ADT后产生雄激素抵抗，使雄激素依赖型前列腺癌进展为雄激素非依赖性前列腺癌( androgen independent prostate cancer,AIPC)或激素抵抗型前列腺癌( hormone refractory prostate canc-er，HRPC)。若发展成为AIPC或HRPC易导致前列腺癌复发，患者生存率会大大降低，且没有较好的治疗手段能明显延缓生存时间。雄激素水平是前列腺癌复发的关键因素，即使雄激素水平在去势水平，AR的激活作用也会一直持续。在ADT后，AR的高表达会缩短去势后前列腺特异性抗原( prostate-specific antigen，PSA)升高的时间，而在雄激素抵抗并发生前列腺癌转移的患者中，AR核染色阳性的患者的死亡率显著增加。

　　SOXs是SRY的同源基因，其共同特点是含有1个编码79个氨基酸的HMG-box，与SRY的产物具有50%以上的同源性。目前发现的SOXs有20多个，其与细胞分化、增殖相关，如性别决定、软骨形成、神经系统发育等。SOX9是前列腺芽上皮早期分化的必需基因，在小鼠前列腺发育的初级阶段中表达，敲除后可导致腹侧前列腺的发育障碍及前列腺的畸形分化。SOX9在原发性前列腺癌中表达，在生化复发前列腺癌及前列腺癌细胞系中高表达，受Wnt/beta-catenin通路的调节，起到促进前列腺发育和维持前列腺上皮细胞的作用。

　　本研究通过收集临床组织样本，进行免疫组化检测，发现SOX9在前列腺癌中的表达水平升高，AR在前列腺癌中的表达水平也升高，同时在泰勒数据库中发现SOX9的表达水平与AR相关，并呈正相关关系。有研究表明高水平的外源性SOX9会降低AR的表达和活性，反之会促进AR的表达和活性，在前列腺癌中SOX9可调节AR的表达、降低细胞的分化。SOX9在前列腺癌发展中扮演双重角色，其高表达可促进雄激素依赖型前列腺癌向AIPC进展，是促癌基因;而在AIPC中SOX9是无生化复发生存率的保护因子，可抑制前列腺癌的生化复发，是抑癌因子。因此高水平的SOX9可能通过抑制前列腺癌中AR的表达，从而抑制前列腺癌生化复发。这表明通过验证SOX9与AR在前列腺癌中的表达水平以及其调控关系，可为SOX9成为临床前列腺癌预后指标、可能的分子靶标提供更充分的证据。

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