HPLC法测定不同产地无花果中芦丁的含量

　　HPLC法测定不同产地无花果中芦丁的含量

　　刘 莹1 陈烁晨2

　　摘要：目的：建立高效液相色谱法研究无花果药材的质量控制标准。方法：采用Agilent Eclipse XDB-C，。(4.6mmx250mm,5ym)为填充剂，以0.4%磷酸为流动相A，以甲醇为流动相B，流速l.OmL/min;柱温：30'C，检测波长255nm，进样量10VL，测定无花果药材中芦丁的含量。结果：对8批不同产地无花果药材进行试验，芦丁在20.53~102.65y,g/mL范围内呈现良好的线性关系(r=0.9999,n=6)，平均回收率为102.8，RSD为2.0%。结论：建立的HPLC方法简便、准确可信，可作为无花果药材的质量控制标准。

　　关键词：无花果芦丁高效液相色谱法质量控制标准

　　中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1672-8351( 2018 )11-0001-02

　　无花果为桑科( Moraceae)植物无花果Ficus carica L.的干燥未成熟隐花果，别名阿驵、阿驿、底珍(《酉阳杂俎》)，映日果(《便民图纂》)，优昙钵(《广州志》)，蜜果(《群芳谱》)，文仙果(《草木便方》)，挣桃(《浙江药用植物志》)，始载于《救荒本草》，云：“生山野中，今人家园圃中亦栽。叶形如葡萄叶颇长，硬而厚，稍作。枝叶间生果。初则青小，熟大，似紫茄色。其味甘。”l3l《本革纲目》载于果部夷果类。李时珍考日：“无花果凡数种，此乃映日果也。及广中所谓优昙钵及波斯所谓阿驵也。”由此表明，古代无花果亦存在多品种问题，李时珍对无花果进一步描述：“枝柯如枇杷树，三月发叶，如花构叶，五月内不花而实，实出枝间，状如木馒头，其内虚软。采以盐渍，压实令扁，晒干充果实。熟则紫色，软烂甘味如柿而无核也。古代无花果与现今无花果描述相吻合。芦丁具有抗炎、抗病毒等多种药理活性，在无花果中的含量较高，测定无花果中芦丁的含量可用于该药材的质量控制研究。

　　1仪器与试药

　　Waters e2695高效液相色谱仪，Mettler Toledo XS-205天平;甲醇为色谱纯，水为纯化水，磷酸为分析纯;芦丁对照品(中检院，批号100080-201409，91.9%)。不同产地无花果药材样品信息见表1。

　　表1无花果样品信息表

　　2方法与结果

　　2.1溶液制备

　　2.1.1对照品溶液：取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每ImL含40pdg的溶液，即得。

　　2.1.2供试品溶液：取本品粉末(过三号筛)3g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，称定重量，水浴加热回流3h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　2.2色谱条件：Agilent Eclipse XDB-C18(4.6mmx250mm，5斗m)为填充剂;以0.40/0磷酸为流动相A，以甲醇为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱;流速：l.OmL/min;柱温：30℃;检测波长：255nm;进样量.：10VL。详见表2。

　　表2

　　2.3方法学验证

　　2.3.1线性关系考察：分别精密吸取对照贮备液配制成芦丁浓度分别为20.53、41.06、61.59、82.12、102.65pdg/mL，进样lOlcL，记录峰面积，以浓度为横坐标，以峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线，芦丁回归方程为y=47613x-54955，r=0.9999，结果表明芦丁对照品浓度在20.53—102.65 yg/mL范嗣内呈现良好的线性关系。

　　2.3.2精密度试验：精密吸取芦丁浓度为61.59yg/mL的对照品溶液，按照色谱条件连续进样6次，记录芦丁峰面积。RSD为20.2%(n=6)。

　　2.3.3重复性试验：取同一批样品，按照供试品溶液制备方法操作，平行制备6份，按上述色谱条件测定，记录峰面积，结果峰面积RSD为0.7%，结果表明该方法重复性良好。

　　2.3.4稳定性试验：照溶液的制备项下的供试品溶液的制备，分别在Oh、2h、4h、8h、12h、24h进样，测定芦丁含量，结果RSD为0.9%(n=6)，表明样品溶液中的芦丁在24h内稳定。

　　2.3.5专属性试验：在本色谱条件下，芦丁峰形良好，无杂质干扰。见图1-3。

      图1专属性试验HPLC色谱图

　　A.对照品溶液B.供试品溶液C.空白溶剂

　　图2无花果样品芦丁峰光谱图

　　2.3.6低检测限和定量限：将对照品储备液用甲醇进行多次等倍稀释，信噪比S/N为10时，芦丁定量限为0.01376yg/mL。见图4。

　　图4

　　2.3.7加样回收率试验：取同一批样品(芦丁含量为0.3709mg/g)6份，每份1.5g，精密称定，分别精密加入含芦丁对照品溶液20mL[称取芦丁对照品(91.9%)11.98mg，置50mL容量瓶中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度。精密量取50mL，置500inL容量瓶巾，加甲醇稀释至刻度]，照供试品溶液制备方法操作，按上述高效液相色谱条件测定，计算回收率，结果见表3。

　　表3芦丁加样回收率

　　2.4分取上述8批样品，按上述方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，含量测定结果见表4。

　　表4芦丁的含量测定结果

　　从上表可以得出，8批样品中，低测定值为0.2984mg/g，高测定值为0,5098mg/g，饮片的平均测定值为0.4233mg/g，以平均值的80010设限，为0.3386mg/g。暂规定本品按干燥品计算，含芦丁( C27H300.。)不得少于0.30mg/g。

　　3讨论

　　3.1提取溶剂的选择：考虑到芦丁的溶解性，选择甲醇为提取溶剂。

　　3.2提取方式的选择：比较超声提取和回流提取，结果两种方式提取效率接近，但甲醇长时间超声放热，溶液易挥发，故选择回流提取方式。

　　3.3回流时间的选择：分别回流th、2h、3h、4h，结果回流3h即可提取完全，故选择提取时间为3h。

　　3.4含量测定的成分选择及结果分析：芦丁具有抗炎、抗病毒等多种药理活性，且其在无花果中的含量较高，以此作为质控成分，可以考察无花果中黄酮类成分的含量，评价无花果饮片质量。

　　参考文献

　　[1] 江苏省中药材标准[M].江苏科学技术出版社，1989:39-40.

　　[2] [2]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草.第二册第五卷[M].上海：上海科学技术出版社，1999:484-486.

　　[3]江苏新医学院，中药大辞典(上册)[M].人民卫生出版社，1977:341.

　　[4]李时珍.本草纲目(校点本下册)[M].人民卫生出版社，1980:31.