核转录因子5在重度子痫前期胎盘中的表达及其与围生儿结局的相关性研究

　　核转录因子5在重度子痫前期胎盘中的表达及其与围生儿结局的相关性研究

　　李琼，杨菊芬 民勤县人民医院妇产科，甘肃民勤733399

　　摘要：目的探讨核转录因子5( NFAT5)在重度子痫前期胎盘中的表达及其与围生儿结局的关系。方法 以2015年7月-2017年7月在民勤县人民医院行剖宫产分娩的重度子痫前期孕妇75例为重度子痫组;选取同期非子痫前期原因行剖宫产术的健康妊娠孕妇60例为对照组。采用免疫组化法检测胎盘组织中NFAT5的表达;采用RT- PCR法检测胎盘组织中NFAT5mRNA表达。对胎盘中NFAT5 mRNA水平与围生儿结局进行相关性分析。结果两组孕妇的年龄、分娩孕周、孕妇分娩时BMI、胎儿出生体质量、胎盘重量、新生儿Apgar评分、术中出血量、术后2h出血量及术后24 h总出血量比较，差异均有统计学意义(均P

　　关键词：重度子痫前期;NFAT5;围生儿;胎儿生长受限

　　子痫前期是一种常见的系统紊乱疾病，其主要以蛋白尿、高血压等症状为特征，其对母婴健康带来巨大威胁，严重者可引发母婴死亡，是引发围生期母婴死亡的主要原因之一。我国子痫前期发病率5%，子痫前期通常可引发胎儿生长受限及早产等并发症发生，增加了新生儿窒息、神经发育受损、死婴等风险。有关胎盘局部高渗状态的研究认为，高渗状态下的细胞脱水会引发电解质浓度上升并导致细胞凋亡，而肌醇与山梨糖醇等有机渗透物质的累积可取代电解质使得细胞逐渐适应高渗应激口1。有研究发现，有机渗透物质如肌醇与山梨糖醇等在生长受限胎儿胎盘组织中的浓度出现了显著升高。作为信号转导因子Rel/NFKB/NFAT家族成员之一，核转录因子( NFAT5/TonEBP)在胎盘组织中广泛存在。核转录因子5 (NFAT5)是一种渗透压转录因子，其可通过调节渗透物质的表达对细胞进行调控，从而令细胞逐渐适应高渗环境。新的报道已经证实，NFAT5在子痫前期患者中表达升高。本研究分析NFAT5在重度子痫前期胎盘中的定位、表达及意义，探讨其对围生儿结局的影响。

　　1对象与方法

　　1.1 研究对象 以2015年7月-2017年7月在民勤县人民医院行剖宫产分娩的75例重度子痫前期孕妇为研究组，所有对象均符合相关标准，被确诊为重度子痫前期。选取75例同期健康妊娠行剖宫产的孕妇为对照组，均为自然受孕且为单胎妊娠。两组孕妇既往均无糖尿病、高血压、心脏病等疾病史。本组研究均获各研究对象同意并签署知情同意书。本研究获得伦理委员会批准。

　　1.2标本采集所有对象均在剖宫产后15 min内取胎盘中央组织2块(1.0 cmxl.0 cmxl.0 cm)，采用4 cC生理盐水漂洗干净，将其中一块固定于10 010甲醛，常规石蜡包埋切片;另一块置于EP管(1.5 ml)中，置人液氮进行冷却，并放人冰箱冷存备用(-80℃)。

　　1.3检测方法胎盘组织中的NFAT5表达采用免疫组化法进行检测。以兔抗人NFAT5多克隆抗体作为一抗对胎盘组织进行SP染色，操作步骤严格按试剂盒说明执行。运用荧光显微镜采集图片。如滋养细胞中胞膜或胞质呈黄褐色颗粒或棕黄色颗粒，即定为阳性表达。从切片染色结果中选取5个视野的组织部位或计数1 000个组织细胞进行观测，显微镜400倍下扫描，计算平均AOD值。胎盘组织中NFAT5 mRNA表达采用RT-PCR法检测。运用RNA快速抽提试剂提取总RNA，逆转录为cDNA后，采用染料法执行RT-PCR。RT-PCR的反应条件和操作严格依照说明书执行，’重复3次，记录CT值平均值，计算两组2-AACT值并记录。

　　1.4统计学分析采用SPSS 21.0统计软件进行统计学分析。计量资料组间比较采用(x+s)表示，两独立样本f检验和两独立样本秩和检验，采用Pearson相关分析进行相关性分析。

　　2结果

　　2.1 两组一般资料比较 两组孕妇均为初孕初产。两组孕妇的年龄、分娩孕周、分娩时BMI、胎儿出生体质量、胎盘重量、新生儿Apgar评分、术中出血量、术后2h出血量及术后24 h总出血量比较，差异均有统计学意义(均P

　　2.2 两组胎盘组织中NFAT5表达情况比较 NFAT5蛋白主要表达于胎盘滋养细胞的胞核与胞质之中，少量表达于绒毛间质细胞中，胞核内可见深棕色染色，染色强度高于胞质，呈棕褐色与棕黄色颗粒染色，着色不均匀。重度子痫组中的NFAT5蛋白阳性染色的细胞主要表达于细胞滋养细胞和绒毛间质细胞，呈棕褐色的强阳性表达。对照组中NFAT5蛋白阳性染色的细胞数较少，主要表达于细胞滋养细胞，染色强度明显减弱。两组NFAT5分布情况一致，但重度子痫组中NFAT5阳性细胞数量明显增多，阳性染色强度也显著增强，整个胎盘间质细胞呈淡棕色染色。 重度子痫组NFAT5蛋白的表达水平高于对照组，胎盘组织中NFAT5 mRNA表达水平高于对照组，差异均有统计学意义(均P

　　2.3 相关性分析 分析重度子痫组中NFAT5 mRNA相对表达量与分娩孕周、新生儿出生体质量、胎盘重量均呈负相关关系(P<0.05)，与孕妇分娩时BMI呈正相关关系(P<0.05);与孕妇年龄、术后24 h出血量及新生儿Apgar评分无明显相关性(P>0. 05)。见表3。

　　表1两组一般资料比较(i±s)

　　表2两组胎盘组织中NFAT5蛋白及mRNA的表达比较(x+s)

　　表3重度子痫组胎盘组织中NFAT5与围生儿结局相关性

　　3讨论

　　作为渗透转录因子，NFAT5能够将有机渗透物质导入细胞内，以调节细胞内的渗透压平衡，使细胞逐渐适应高渗环境。目前，NFAT5与渗透物质的作用机制尚不明确，但有研究。91表明它们在胚胎形成及胎儿发育中有重要作用。NFAT5基因敲除的小鼠胚胎出现了发育能力明显降低的现象。NFAT5在胎盘形成、细胞迁移与细胞增殖期间T细胞免疫反应中的作用十分重要。研究报道。61显示，NFAT5在重度子痫前期患者的胎盘组织中表达显著升高。在妊娠过程中，早期胎盘发育处于低氧环境中，持续出现的缺氧可能导致子痫前期，并引发胎儿生长受限的发生。有研究4发现，NFAT5蛋白在子痫前期孕妇胎盘组织中的水平明显高于对照组孕妇，且在JAR细胞内持续的低氧状态可能诱导NFAT5 mRNA表达。有报道认为，NFAT5水平上升系高渗应激下滋养细胞的一种反应。

　　本组研究结果显示，在重度子痫组及对照组中都发现了NFAT5 mRNA及蛋白表达，只是表达量不同。本组研究显示，NFAT5主要分布于绒毛滋养细胞和血管内皮细胞中，且重度子痫组显著高于对照组( P<0. 05)。说明重度子痫组的胎盘病变较为严重，胎盘出现了持续性缺血缺氧状况，继而释放了大量不同类型的细胞毒性因子，使得细胞内微环境改变和恶化。

　　作为一种核转录因子，NFAT5可诱导SLC5A3(渗透性保护基因)的表达，进而调节渗透物质，如山梨糖醇等以维持渗透压平衡。在人类胎盘中，存在着高浓度的山梨糖醇、肌醇等渗透物质，有助于细胞适应高渗应激环境。因此推测，重度子痫组胎盘的发育不良，严重的病理改变导致了胎盘微环境改变，缺血缺氧状况严重，终激活NFAT5，以调节各种渗透物质表达来帮助滋养细胞适应不利环境。

　　本研究发现，NFAT5蛋白在两组胎盘组织绒毛滋养细胞与血管内皮细胞内均有表达，分布特点相似，对照组中有少量滋养细胞表达较弱的NFAT5。提示适量NFAT5活化是滋养细胞正常所需。本研究显示，重度子痫组中NFAT5蛋白及NFAT5 mRNA表达水平较对照组显著升高，表明NFAT5的表达水平与子痫前期的发生发展密切相关。

　　目前，NFAT5在子痫前期病患胎盘组织中的作用机制尚存争议。NFAT5借助调整渗透压保护基因，以维护细胞对于胞内小分子的有机渗透物，如牛磺酸、甜菜碱、山梨醇、肌醇等调节和运转，从而保持细胞的结构完整和功能发挥。作为正常免疫系统及淋巴系统的一项功能，适应适当的渗透压变化刺激是正常的，但是一旦渗透压变化超出细胞的承受力范围，则可能发生炎症性疾病。高渗环境能够导致基因出现损伤，导致细胞凋亡。高渗也可激活NFAT5，对于暴露在高渗状态下的细胞，机体借助转运蛋白，使有机渗透物质积聚，以实现自我保护。

　　重度子痫前期能严重伤害胎盘功能，导致胎盘缺血缺氧滋养细胞大量分泌各种因子进入母血循环或脐血内，并对妊娠结局造成影响。因此，对胎盘组织分泌的因子进行检测可以起到预防疾病发展的作用。有研究发现，在高渗环境下，NFAT5 -旦激活，将导致促炎介质得以释放。在妊娠过程中，孕妇一旦出现妊娠高血压，就会出现小动脉痉挛，血流动力学发生改变，导致胎盘血流量减少，胎盘内就会出现高浓度的肌醇、山梨糖醇等渗透物质。而NFAT5

　　可以促进渗透性保护基因的表达。因此，其可以间接性地反映胎盘内的渗透浓度，而渗透环境与炎症状态则有着紧密的联系。

　　有研究阳]认为，除了反映妊娠高血压的病况，NFAT5水平还能预测围生儿结局。随着子痫前期的病情加重，NFAT5不断升高，表明NFAT5水平能够准确反映子痫前期的严重程度。本组研究还发现，重度子痫组胎盘组织中NFAT5表达与分娩孕周、胎盘重量、新生儿出生体质量均呈负相关关系。提示NFAT5水平越高，则围生儿结局就越差。证实孕妇胎盘组织中NFAT5水平可以反映围生儿结局的好坏，对预测妊娠结局有帮助。

　　本组研究显示，重度子痫组孕妇年龄和分娩时BMI均显著高于对照组，提示年龄和BMI增高可能是子痫前期发病的危险因素。在重度子痫组中，胎盘组织中NFAT5 mRNA表达水平与孕妇分娩时BMI呈正相关。已有研究表明，BMI越高，子痫前期发生率越高，而肥胖程度也直接影响子痫前期的发生。

　　综上所述，NFAT5在重度子痫前期孕妇的胎盘组织中表达明显上升，孕妇胎盘组织中NFAT5水平与围生儿结局密切相关，对NFAT5表达进行检测有助于预测妊娠结局。