丹参素钠对慢应激抑郁大鼠海马神经元的保护作用

　　丹参素钠对慢应激抑郁大鼠海马神经元的保护作用

　　王好峰，张莹，张芬，张树成，石翠格

　　关键词：抑郁;海马;神经元;阿米替林;丹参素

　　丹参素是丹参中的主要水溶性有效成分，具有明显的药理活性，包括心肌保护、抑制血栓形成、抗炎和增强免疫等作用。丹参素在自然界中不稳定，故常用其钠盐，多用于活血化瘀，理气止痛。本研究前期采用小鼠和大鼠急性抑郁模型证明丹参素钠具有抗抑郁作用，能够保护皮质酮损伤的PC12细胞。为进一步探讨丹参素钠抗抑郁的作用机制，本实验采用大鼠慢应激建立抑郁模型，观察丹参素钠对慢应激大鼠动物行为学的影响以及海马神经元形态结构，以阐明丹参素钠抗抑郁作用的神经细胞生物学机制。

　　1材料与方法

　　1.1 实验材料

　　丹参素钠为上海友思生物技术有限公司产品，阿米替林为湖南同庭药业股份有限公司产品。

　　1.2 实验动物分组

　　选择雄性SD大鼠50只，180～220 g，由维通利华实验动物中心提供。实验前在安静环境下适应性饲养1周，自由进食、饮水，自然昼夜节律光照。随机分为5组，每组10只。正常对照组：正常饮水进食，不给任何刺激。慢应激组：应激前th给予蒸馏水灌胃。丹参素钠低剂量组：应激前th给予丹参素钠12 mg/kg灌胃。丹参素钠高剂量组：应激前1 h给予丹参素钠24 mg/kg灌胃。阿米替林组：应激前th给予阿米替林10mg/kg灌胃。灌胃给药体积2 ml/kg。

　　1.3 慢应激动物模型建立

　　大鼠单笼饲养，接受28 d各种刺激。包括：禁水24 h、禁食24 h、睡眠剥夺、夹尾1min、4℃冰水游泳5 min、束缚1.5 h、潮湿垫料加倾斜饲养。每天随机安排1种刺激，同种刺激不连续出现。

　　1.4旷场实验所用敞箱高50 cm，长宽均为100cm，底面划分为面积相等的25块。以大鼠穿越底面方块数作为水平活动( crossing)评分，以直立次数为垂直活动(rearing)评分。每只大鼠仅进行1次测定，每次5min。

　　1.5糖水偏爱实验应激刺激结束后，各组大鼠预适应饮用2瓶不同的水：1瓶1. 5%蔗糖水和1瓶自来水。第2天测试20：00～08：00自来水和蔗糖水饮用量(通过称饮水瓶质量)，糖水偏爱度一糖水饮用量/(糖水饮用量十自来水饮用量)×100%。

　　1.6病理学观察大鼠脑组织使用多聚甲醛灌流固定，常规病理学切片苏木精伊红染色，显微镜观察脑组织病理学改变。采用免疫荧光和Western blot检测脑组织c-fos表达水平。

　　1.7统计学方法采用sPSs io.O统计软件，计量资料以x±s表示，多组间比较采用方差分析，P<0. 05为差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 各组旷场实验和糖水偏爱实验结果比较

　　与正常对照组比较，慢应激组水平运动和垂直运动评分及蔗糖偏爱度明显减少，差异有统计学意义(P<0. 01)。与慢应激组比较，丹参素钠低剂量组、丹参素钠高剂量组和阿米替林组水平运动.和垂直运动评分及蔗糖偏爱度明显升高，差异有统计学意义。

　　表1各组旷场实验和糖水偏爱实验结果比较(n=10，x±j)

　　2.2各组大鼠海马CA1区神经元结构

　　正常对照组海马CA1区颗粒细胞体积正常，数量较多，没有空泡花。与正常对照组比较，慢应激组海马CA1区颗粒细胞体积变小，细胞数量减少，部分细胞出现空泡化。与慢应激组比较，丹参素钠高剂量组和阿米替林组海马CA1区颗粒细胞体积略大，数量增多，细胞空泡化减少。

　　3讨论

　　机体发生抑郁时，下丘脑一垂体肾上腺( HPA)轴就会被激活。在脑区中，海马是调控HPA轴活性的重要的部分之一。生理状态下，糖皮质激素可以加强海马对HPA轴的负反馈作用。抑郁状态下，糖皮质激素对于HPA轴的负反馈调节被中断，表现为HPA轴异常和激活。并且，糖皮质激素可损害海马神经元，降低神经再生等。头颅MRI研究发现，抑郁症患者海马体积变小，并且其缩小程度与抑郁严重程度呈正相关。

　　不可预知慢应激模型可较真实模拟抑郁症的发病因素和机制，多用于研究抑郁症的发病机制和药物作用研究。本研究结果显示，与慢应激组比较，丹参素钠低剂量组、丹参素钠高剂量组和阿米替林组水平运动和垂直运动评分及蔗糖偏爱度明显升高，其可改善大鼠行为，显示出良好的抗抑郁效果。应用苏木精伊红染色可以反映神经元形态结构的变化。实验结果发现，与正常对照组比较，慢应激组海马CA1区颗粒细胞体积变小，细胞数量减少，部分细胞出现空泡化，丹参素钠高剂量组和阿米替林组显著改善这种病理改变。神经元结构损伤必然导致神经元功能的受损，丹参素钠可改善神经元结构，从而保护神经元功能。本实验室前期实验工作发现，丹参素钠可保护皮质酮损伤的PC12细胞，增加细胞活力H1。本实验从整体动物水平进一步证明了丹参素钠的神经保护作用，这可能是丹参素钠抗抑郁作用的机制之一。c-fos基因主要参与细胞早期活动，c-fos基因被激活后可表达fos蛋白，该蛋白是细胞功能常用的评价指标。神经细胞在缺血缺氧和药物损伤及兴奋等情况下均可发生c-fos激活，并且在一定程度上c-fos阳性神经元数量与受损程度密切相关。因此，c-fos表达可视作神经元接受伤害性刺激激活的标志幽胡。本研究发现，慢应激组海马CA1区c fos表达较正常对照组明显升高，说明慢应激通过c—fos对大脑持续性损伤。丹参素钠可明显下调c-fos表达，从而保护神经元功能。

　　本实验在前期工作基础上，进一步证明丹参素钠具有明确抗抑郁作用，其作用机制可能与神经元保护有关。丹参素钠作为一种传统中药单体，其抗抑郁作用的发现，将为新型抗抑郁药物的研发提供思路。

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