目的 建立同时测定三黄片中盐酸小檗碱、黄芩苷、大黄素、大黄酚含量的RP-HPLC法.方法 采用Thermo Hypersil GOLD aQ色谱柱(250 mm×4.6 mm,5.0μm),以甲醇-0.1％磷酸水溶液为流动相,进行梯度洗脱,流速1.0 ml/min,柱温30℃,检测波长254 nm.结果 盐酸小檗碱、黄芩苷、大黄素、大黄酚的分离度均符合要求,线性范围分别为0～0.6348μg(r=0.9999)、0～1.0172μg(r=0.9999)、0～0.8024μg(r=0.9999)、0～0.9672μg(r=0.9999);平均回收率(n=9)分别为101.03％、99.81％、99.35％、99.54％;定量限分别为0.0363、0.0210、0.0497、0.0793 mg/g;供试品溶液在24 h内稳定,RSD(n=5)分别为0.48％、0.56％、0.68％、0.49％;方法耐用性良好,在不同柱温(±1℃)条件下,RSD(n=3)分别为0.57％、0.42％、0.44％、0.65％,不同流速(±0.1 ml/min)条件下,RSD(n=3)分别为0.74％、0.29％、0.46％、0.56％.12批样品中盐酸小檗碱、黄芩苷、大黄素、大黄酚含量分别为4.6303～5.5866、14.5514～18.8189、0.1711～2.7984、0.5299～2.9254 mg/小片.结论 本法经方法学验证,适用于三黄片的质量控制.