内质网应激介导的胎盘滋养细胞凋亡在妊娠期糖尿病合并胎儿生长受限中的研究

　　内质网应激介导的胎盘滋养细胞凋亡在妊娠期糖尿病合并胎儿生长受限中的研究

　　韩云 陈丽平 郑艳莉 吴爱民 鲁晓燕 韩煜雯 季金龙

　　【摘要】目的探讨内质网应激介导的胎盘滋养细胞凋亡在妊娠期糖尿病合并胎儿生长受限中的作用。方法选取37例妊娠期糖尿病合并胎儿生长受限的孕妇为GDM+FGR组，同期产检的50例妊娠期糖尿病合并正常新生儿出生体重的孕妇为对照组，分析两组孕妇妊娠结局、胎盘功能、胎盘内质网应激指标GRP78、内质网应激转录因子CHOP、凋亡相关分子Bax及Bcl-2的mRNA及蛋白表达水平。结果①与对照组相比，GDM+FGR组孕期血糖控制较差，易并发生妊娠期高血压疾病、胎儿宫内窘迫、剖宫产及新生儿窒息(P<0.01);②GDM+FGR组血清胎盘泌乳素水平下降，S/D比值增高，胎盘功能明显下降(P<0.01);③与对照组相比，GDM+FGR组GRP78、CHOP及Bax的mRNA及蛋白水平均明显升高，Bcl-2则显著下降(P

　　【关键词】妊娠期糖尿病;胎儿生长受限;胎盘;内质网应激;凋亡;妊娠结局

　　妊娠期糖尿病( gestational diabetes mellitus，GDM)发病率在我国高达17.5% ~18.9%…。其中，妊娠期糖尿病合并胎儿生长受限( fetal growth restriction，FGR)是胎死宫内及新生儿死亡的主要原因。目前关于妊娠期糖尿病合并胎儿生长受限与内质网应激介导的滋养细胞凋亡报道较为少见。本研究通过检测妊娠期糖尿病合并胎儿生长受限及妊娠期糖尿病合并正常新生儿出生体重孕妇的胎盘重量、胎盘功能、胎盘滋养细胞内质网应激及凋亡指标，以期为临床诊治提供理论基础及新思路。

　　资料与方法

　　1.研究对象：本研究由南通市第一人民医院医学伦理委员会伦理审查并批准，选取2012年2月至2017年12月产检至分娩并签署知情同意书的孕妇，参照妇产科学妊娠期糖尿病及胎儿生长受限的诊断标准，分为妊娠期糖尿病合并胎儿生长受限组(GDM+FGR组)和妊娠期糖尿病合并正常新生儿出生体重组(对照组)，两组孕妇既往无慢性高血压、糖尿病等病史，无特殊饮食限制，孕期均接受产科营养门诊指导。

　　2.孕期血糖及体重增长评估诊断标准：①妊娠期糖尿病孕期血糖控制情况：根据孕期血糖监测情况分为孕期血糖控制满意者及血糖控制不满意者。血糖控制满意的标准：孕妇无明显饥饿感，空腹血糖控制在3.3。5.3 mmol/L.餐前30 min: 3.3~5.3 mmol/L，餐后2h及夜间：4.4。6.7 mmoVL;②孕期体重增长评估：根据2009年美国国家科学院医学科学院(IOM)推荐的孕期增重适宜值：低体重孕妇为12.8 ~18 kg，正常体重为11.5 N16 kg，超重为7.0—11.5蚝，肥胖为5.0—9.Okg，该孕期体重增长情况进一步分为体重增长理想者及体重增长不理想者。

　　3.方法

　　(1)妊娠结局观察指标：比较两组产妇的妊娠合并症、分娩方式和围生儿合并症情况。

　　(2)胎盘功能指标检测：放射免疫法测定血清胎盘泌乳素(human placental lactogen，HPL)，Philips iu22多普勒超声诊断仪测定脐血流S/D比值。

　　(3)实时荧光定量PCR检测胎盘内质网应激特征性分子GRP78、内质网应激转录因子CHOP、凋亡相关分子Bax和Bcl-2的mRNA表达水平：采用TRhol Reagent试剂(美国Invitrogen)提取组织总RNA，使用Power SYBRGreen进行检测(StepOnePlus Real-Time'PCR System，Applied Biosystems AB).PCR引物为：GRP78,5’-TGCCAT GGT TCT CAC TAA AAT G-3’(F),5’-ATT TAG GCCAGC AAT AGT TCC A-3’(R); CHOP,5’-CTG AGT CATTGC CTI' TCT CCT T-3’(F),5’-TAG GTA CCC CCAITTTCA TCT G-3’(R); Bax,5’-ACA GTA ACA TGG AGC TGCAGA G-3’(F),5’-CAA AGT AGA AAA GGG CGA CAA C-3’(R); Bcl-2,5’-GAT TGT GGC CTI' CTT TGA GIT C-3’(F),5’-CAG GTA CTC AGT CAT CCA CAG G-3’(R)。采用2—6 AO法计算目的基因的mRNA相对表达量。

　　(4)蛋白印迹法检测胎盘组织GRP78、CHOP、Bax和Bcl-2蛋白表达：按蛋白裂解液说明书抽提、浓缩得到蛋白样本，5%脱脂奶粉室温封闭孵育2h，加入一抗：GRP78、CHOP抗体(Abcam，1: 1000稀释)、Bax、bcl-2抗体(cellsignaling technology，1：1 000稀释)，4℃封闭过夜，二抗窒温孵育th，增强化学荧光发光法显影。

　　4.统计学处理：应用软件SPSS 19.0进行统计学分析，正态分布计量资料采用独立样本的f检验进行组间比较;计数资料采用x2检验进行组间比较;采用Pearson相关系数分析法进行双变量相关性检验，P<0.05为差异有统计学意义。

　　结 果

　　1.两组孕妇一般临床特征及妊娠结局比较：两组孕妇的年龄、孕产次、孕期OGTT检查及孕周体重增长不满意者均无统计学差异(P>0.05);与对照组相比，GDM+FGR组孕妇的孕期血糖控制较差，妊娠期高血压疾病、胎儿宫内窘迫、剖宫产及新生儿窒息的发生率明显增高，差异均有高度统计学意义(P<0.01)，见表1。

　　表1 两组孕妇临床特征及妊娠结局的比较[例(%)]

　　2.两组新生儿出生体重、胎盘重量及胎盘功能的比较：GDM+FGR组新生儿出生体重为(2253.90±147.24)g、胎盘重量为( 449.70±91.35)g，均明显低于对照组[( 3487.00±260.39)g和(562.90±65.63)g]，差异有统计学意义( P

　　3.两组胎盘组织中GRP78、CHOP、Bax和Bcl-2的mRNA表达水平：GDM+FGR组及对照组胎盘组织中GRP78、CHOP、Bax和Bcl-2的mRNA表达分别为( 4.65±1.31)、(5.31±1.44)、(5.39±1.40)、(2.72±0.79)和( 2.82±0.77)、(2.08±0.79)、(3.01±0.83)、(4.90±1.45),两组相比，差异均有统计学意义(P<0.01)。

　　4.两组胎盘组织中GRP78、CHOP、Bax和Bcl-2的蛋白表达水平：GDM+FGR组及对照组胎盘组织中均可检测到GRP78、CHOP、Bax和Bcl-2的蛋白表达，GDM+FGR组胎盘组织中GRP78、CHOP和Bax的蛋白表达水平明显高于对照组，而Bcl-2的蛋白表达水平则显著低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.01)。

　　讨 论

　　1.妊娠期糖尿病合并胎儿生长受限的发病原因：胎儿生长受限可引起胎儿宫内窘迫、死胎等多种不良围产结局。本研究发现妊娠期糖尿病合并胎儿生长受限孕妇的孕期血糖控制较差，易并发妊娠期高血压疾病，与王凤珍等”研究一致。同时，该研究亦发现妊娠期糖尿病合并胎儿生长受限孕妇的胎盘功能显著下降，可能与孕期血糖控制较差或/和并发妊娠期高血压疾病单独或协调其他因素共同作用于胎盘，进而影响妊娠结局。

　　2.妊娠期糖尿病合并胎儿生长受限与胎盘滋养细胞内质网应激、凋亡的关系：近年来滋养细胞的过度凋亡已在胎儿生长受限的研究中引起重视H1。内质网是胎盘转运代谢功能的重要细胞器，当细胞环境处于不利状态，可引起从内质网到胞质和胞核的信号传导，终导致适应性存活或细胞凋亡。目前已知内质网应激特有的凋亡途径有三条：转录因子CHOP/GADD153途径、Caspase-12活化和激酶ASKl/JNK的激活。CHOP是内质网应激反应特异的转录因子，参与能量代谢、增殖、分化和凋亡的调节。生理情况下，CHOP表达很低，但在内质网应激反应时被显著诱导，进而激活下游一系列凋亡分子诱导细胞凋亡。本研究发现妊娠期糖尿病合并胎儿生长受限胎盘组织中内质网应激的特异性标志蛋白GRP78、内质网应激转录因子CHOP及促凋亡分子Bax的mRNA及蛋白表达水平均明显升高，抗凋亡因子bcl-2表达则显著降低，提示妊娠期糖尿病合并胎儿生长受限可能启动了内质网应激相关的CHOP凋亡通道。 综上所述，妊娠期糖尿病合并胎儿生长受限可能启动了内质网应激相关的CHOP凋亡信号通道，导致胎盘功能减退，不良围产结局增加。因此，除了严格管理孕期血糖，防治孕期合并症，亦可深入研究内质网应激介导胎盘滋养细胞凋亡的调控机制，找到其潜在的治疗措施，为妊娠期糖尿病合并胎儿生长受限的防治寻找新的思路和手段。

　　参考文献

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