PCR-SSCP实验原理及操作

2018.12.06 17:43

1221 0 0

　　PCR-SSCP分析技术是一种基于单链DNA构象差别的快速、敏感、有效地检测基因点突变的DNA多态方法。下面小编就给大家讲一讲PCR-SSCP实验原理及操作的一些流程。

　　一、　PCR-SSCP实验原理

　　PCR-SSCP技术的基本原理是PCR扩增后的DNA片段经变性成单链DNA，单链DNA在中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳时形成不同的立体构象，其构象直接影响泳动速率，相同长度的 DNA单链其核苷酸顺序仅有单个碱基的差别，就可以产生立体构象的不同，造成泳动速率的不同，产生不同的泳动带。

　　二、PCR-SSCP的实验操作

　　在小于1Kb长度的情况下，DNA片段长度与丙烯酰胺的浓度选择如下:

　　DNA片段长度(核苷酸数) (%)

　　1Kb～700b 3.5

　　700b～500b 5

　　500b～200b 8

　　200b 12

　　在进行SSCP前首先要通过PCR扩增出特异性好的产物(琼脂糖电泳不能有过强的拖尾).

　　1)制备聚丙烯酰胺凝胶(PAG)

　　按上表制所需的胶液，将梳子插入模子，从梳子一端加入胶，当胶液快到梳齿时，使模子向加胶端倾斜，继续慢慢加胶，边加边放端模子以防止气泡形成，室温放置1h使之凝固.然后拔掉梳子，顶部加入1×TbE封闭，备用。

　　2)电泳

　　取10μlPCR产物，加入10μl变性剂(95%甲酰胺，10mmol/LEDTA0.02%溴酚蓝)、30μl 石蜡油，煮沸5min，取出立刻放入冰浴中2min以上，然后将水相全部上样，10-15℃下电泳.开始在300V电压下电泳5min，然后在120V电泳8h，取下凝胶，将其浸在含 0.5ug/ml溴化锭的1×TbE缓冲液中染色30--45min，在紫外灯下观察，或进行银染。

　　3)银染法

　　将PAG板用去离子水洗二次，浸入10%乙醇和0.5%冰醋酸溶液固定6min.用去离子水洗二次，再浸入0.2%AgNO3溶液中10min.用去离子水洗3--5次，然后浸入1.5%NaOH和 0.4%甲醛溶液中显色7min.后，用0.75%NaCO3终止显色。

　　这次小编给大家整理的PCR-SSCP实验原理及操作的文档，读者也可参阅起来。小编已将完整的实验文档上传至网页中，大家可通过以下方式获取：

　　1.注册网站，就可下载

　　2.关注微信公众号后联系客服获取

　　想要了解更多的资料、信息，可持续关注我们，我们将为大家提供有价值、有需求的材料。为大家在科研中省去烦恼。

标签： PCR-SSCP实验原理 PCR-SSCP实验操作

投诉文章 ©著作权归作者所有

喜欢 | 0

快给朋友分享吧！

分享到微博

打开微信“扫一扫”，打开网页后点击屏幕右上角分享按钮

0/200字

更多评论没有更多评论了~

在线工具

PCR-SSCP实验原理及操作