实验室分子生物学常用试剂的配制有哪些

2018.10.29 17:18
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  1、琼脂糖凝胶的配制

  根据所需凝胶的浓度秤取琼脂糖,加入相应电泳缓冲液中,用微波炉加热煮沸至琼脂糖完全溶解,加入适量E混匀,适当冷却后倾入凝胶铸槽中,插入梳子,凝胶厚度不超过梳孔,如有气泡产生则用玻璃棒驱除,不能过早拔除梳子,应待凝胶完全凝结后才能拔除梳子。

实验室分子生物学常用试剂的配制.png

  2、P1、P2、P3的配制

  1的配制:在800ml去离子水中溶入Tri碱6.06g,Na2EDTA 2H2O3.72g,用HCl调整H至8.0,用去离子水调整容积至1升,每升P1内加入RNaseA100mg。

  P2的配制:在950ml去离子水中溶入aOH8.0g,20%SD50ml,调整容积至1升。

  P3的配制:在500ml去离子水中溶入醋酸钾294.5g,用冰醋酸调整H值至5.5,用去离子水调整容积至1升。

  3、LB(Luria-Bertani)培养液、平板的配制

  配制每升LB培养液,应在950ml去离子水中加入:细菌培养用酵母提取物(bacto-yeastextract)5g,细菌培养用胰化蛋白胨(bacto-tryptone)10g,NaCl10g。

  摇动容器直至溶质完全溶解,用5mol/LNaOH(约0.2ml)调节pH值至7.0,加入去离子水至总体积为1L,在151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min。

  4、甲酰胺( deionized formamide )的配制

  直接购买或加 Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中, 用磁力搅拌器轻轻搅拌 1h,可去除甲酰胺中的离子。 经 Whatman 1 号滤纸过滤除去树脂后分成小份,充氮气于 -80 ℃ 贮存(防止氧化)。

  5、苯酚/ 氯仿/异戊醇的配制

  将 Tris-HCl 平衡苯酚与等体积的氯仿 / 异戊醇( 24:1 )均匀混合后,移入棕色玻璃瓶中 4 ℃保存。

  6、PBS Buffer配置方法 (1L):

  组份:137 mM NaCl , 2.7mM KCl , 10 mM Na2HPO4 , 2 mM KH2PO4

  (1)称量下列试剂,置于 1L 烧杯中。

  NaCl 8 g

  KCl 0.2g

  Na2HPO4 1.42 g

  KH2PO4 0.27g

  (2)向烧杯中加入约 800 mL 的去离子水,充分搅拌溶解。

  (3)滴加 HCl 将 pH 值调节至 7.4 ,然后加入去离子水将溶液定容至 1L。

  (4)高温高压灭菌后,室温保存。

  注意:上述 PBS Buffer 中无二价阳离子, 如需要,可在配方中补充 1mM CaCl2 和 0.5 mM MgCl2 。

  7、考马斯亮蓝染色脱色液的配置方法

  组份浓度 10 %( V/V )醋酸, 5%( V/V )乙醇,配制量 1L

  (1) 量取下列溶液,置于 1L 烧杯中。醋酸 100mL,乙醇 50mL dH2O 850mL

  (2)充分混合后使用。

  8、30%( W/V ) Acrylamide的配置方法 :

  (1) 称量下列试剂,置于 1L 烧杯中

  Acrylamide 290g

  BIS 10g

  (2)向烧杯中加入约 600mL 的去离子水,充分搅拌溶解

  (3)加入去离子水将溶液定容至 1L,用 0.45 μm 滤膜滤去杂质。

  (4) 于棕色瓶中 4℃ 保存。

  注意:丙稀铣胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收,其作用有积累性,配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为有可能含有少量的未聚合成份。


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