详细介绍肝星状细胞实验的步骤
肝星状细胞是ECM的主要来源。HSC被激活并转化成肌成纤维细胞样细胞(MFC)。各种成纤维细胞因子均以HSC为终靶细胞，肝星状细胞被激活并转化成肌成纤维细胞样细胞(MFC)。HSC被认为是终的靶细胞。正常情况下，肝星状细胞处于静止状态。那么肝星状细胞实验步骤是什么呢?
肝星状细胞实验步骤如下：
1、小鼠3%戊巴比妥钠腹腔麻醉。以“U”型切口打开腹腔。将肠管推向腹腔左侧，暴露门静脉及下腔静脉。
2、剪一小口，将充满灌流液的针头经小口插入门静脉，止血夹夹住。
3、打开恒流泵的开关开始灌流，并迅速剪断下腔静脉。肝脏在灌注开始几秒内变成黄白色(灌注结束的时候，肝脏上可见白色纹理)。
4、灌流结束，将肝脏移至培养皿中，加入少量(5ml左右)solutionII，显微镜下尽量去除胆管和血管，剪碎肝组织。
5、将搅碎的肝组织倒入50 ml的离心管，加入solutionII至30ml，加入胶原酶，pronase和DNase，37度水浴消化12 min。(如果前面的灌注不好的话，可以适当延长消化时间)
6、消化结束的时候能够看到部分未消化完的肝组织。
7、加入15ml血清终止反应。70μm过滤网过滤。20G，4min离心，去除肝细胞(因为肝细胞重，所以会低速离心也能够沉下去)
8、收集悬浮液，450G，7min使悬浮液中的细胞都沉下去。吸掉悬浮液，加入15%optiprep，充分吹打，在其上轻轻加入5ml11.5%optiprep和5mlGBSS，1400G，17min 离心。GBSS和11.5%optiprep间能够看到浅白色的条带。
9、轻轻收集中间GBSS和11.5%optiprep间层5ml，加入5mlGBSS 450G，8min离心。吸掉悬浮液，加入适当的DMEM培养液，计数，培养。
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